[發(fā)明專利]高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910519578.0 | 申請日: | 2019-06-17 |
| 公開(公告)號: | CN110372771B | 公開(公告)日: | 2021-03-26 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 李秀梅;石冬冬;楊培龍;張海英;聞治國;滿晨 | 申請(專利權(quán))人: | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所 |
| 主分類號: | C07K1/20 | 分類號: | C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06 |
| 代理公司: | 北京法信智言知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11737 | 代理人: | 劉靜榮 |
| 地址: | 100081 北*** | 國省代碼: | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 活力 蠐螬 次級 分離 及其 制備 方法 | ||
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法。本發(fā)明通過將凝膠色譜法與反相高效液相色譜法聯(lián)用,分離蠐螬酶解液,得到次級分離物。本發(fā)明獲得餾分具有較強的抗氧化性及比活力。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法。
背景技術(shù)
蠐螬是金龜甲總科(Scarabaeoedea)幼蟲的統(tǒng)稱,隸屬于鞘翅目,又名核桃蟲、地蠶、土蠶。蠐螬含有多種人類所需的氨基酸和無機元素,臨床上用于促進血液循環(huán)已有數(shù)百年歷史,現(xiàn)代藥理研究表明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、治療口瘡、小兒哮喘、中風(fēng)、血吸蟲病肝硬化等多種藥物活性,是一種極具研究和開發(fā)價值的藥材。研究發(fā)現(xiàn)蠐螬的粗提物具有抗凝活性,且其中的幾種纖維蛋白(原)溶解劑具有抗血栓作用;蠐螬的乙醇和石油醚提取物具有優(yōu)異的抗真菌活性。
越來越多的蛋白質(zhì)水解物被發(fā)現(xiàn)具有抗氧化能力,新型抗氧化肽不斷被開發(fā)。抗氧化肽具有抗脂質(zhì)過氧化能力和螯合金屬離子的能力,還能夠清除生物體內(nèi)過量自由基。資源昆蟲養(yǎng)殖的興起,使昆蟲抗氧化肽的研究也隨之增多。現(xiàn)有技術(shù)根據(jù)不同來源的動植物蛋白的水解物所釋放出不同種類的抗氧化肽,通常采用提取法、化學(xué)水解法、酶法水解、發(fā)酵法、化學(xué)合成法、基因重組法等制備抗氧化肽。目前酶解法是最主要的生產(chǎn)方法,其水解易控制,可定位生產(chǎn)特定的肽,產(chǎn)品安全性極高,成本低,已成為制備食源性抗氧化肽的主要方式。盡管可通過酶解工藝的優(yōu)化而獲得分子質(zhì)量相對集中的組分,但酶解產(chǎn)物中肽的種類繁多、彼此分子量比較接近,再加上活性組分的敏感性,這在很大程度上造成肽分離純化的困難,這已成為制約進一步研究活性肽結(jié)構(gòu)及功能的主要因素。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高比活力的蠐螬酶解次級分離物。
本發(fā)明的再一目的在于提供上述次級分離物的制備方法。
根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物,其由包括以下步驟的方法制備:
(1)采用葡聚糖凝膠柱,以超純水為流動相,在流速為14-16mL/min、柱溫27-33℃、波長為215-225nm的條件下對蠐螬酶解液進行分離,
收集2–4min的餾分,得到初級分離物;
(2)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相,,以體積比為95:5的0.1%三氟乙酸:水為流動相,在流速1mL/min、柱溫27-33℃、波長為215-225nm的條件下對初級分離物進行分離;
收集15–16min的餾分,得到次級分離物。
根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物,步驟(1)選用的葡聚糖凝膠柱為葡聚糖凝膠柱G-15。
根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物,所述蠐螬酶解液由包括以下步驟的方法制備得到:
(a)將蠐螬加入pH 6.8~7.2的緩沖體系中,高速勻漿,得到蟲漿液;
(b)向蟲漿液中加入脂肪酶,在38~42℃條件下酶解;
(c)將步驟(b)得到的液體滅活,靜止分層后,離心,取上清液,得到蠐螬酶解液。
根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物,步驟(a)中,將蠐螬加入緩沖體系中,使蠐螬的濃度為5%。
根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物,步驟(b)中,加入脂肪酶后,脂肪酶與蠐螬的比例為0.6%。
根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物,步驟(b)中,酶解時間為3小時。
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