[發(fā)明專利]高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910519578.0
• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110372771B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李秀梅;石冬冬;楊培龍;張海英;聞治國;滿晨
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 北京法信智言知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法。本發(fā)明通過將凝膠色譜法與反相高效液相色譜法聯(lián)用，分離蠐螬酶解液，得到次級分離物。本發(fā)明獲得餾分具有較強的抗氧化性及比活力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法。

背景技術(shù)

蠐螬是金龜甲總科(Scarabaeoedea)幼蟲的統(tǒng)稱，隸屬于鞘翅目，又名核桃蟲、地蠶、土蠶。蠐螬含有多種人類所需的氨基酸和無機元素，臨床上用于促進血液循環(huán)已有數(shù)百年歷史，現(xiàn)代藥理研究表明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、治療口瘡、小兒哮喘、中風(fēng)、血吸蟲病肝硬化等多種藥物活性，是一種極具研究和開發(fā)價值的藥材。研究發(fā)現(xiàn)蠐螬的粗提物具有抗凝活性，且其中的幾種纖維蛋白(原)溶解劑具有抗血栓作用；蠐螬的乙醇和石油醚提取物具有優(yōu)異的抗真菌活性。

越來越多的蛋白質(zhì)水解物被發(fā)現(xiàn)具有抗氧化能力，新型抗氧化肽不斷被開發(fā)。抗氧化肽具有抗脂質(zhì)過氧化能力和螯合金屬離子的能力，還能夠清除生物體內(nèi)過量自由基。資源昆蟲養(yǎng)殖的興起，使昆蟲抗氧化肽的研究也隨之增多。現(xiàn)有技術(shù)根據(jù)不同來源的動植物蛋白的水解物所釋放出不同種類的抗氧化肽，通常采用提取法、化學(xué)水解法、酶法水解、發(fā)酵法、化學(xué)合成法、基因重組法等制備抗氧化肽。目前酶解法是最主要的生產(chǎn)方法，其水解易控制，可定位生產(chǎn)特定的肽，產(chǎn)品安全性極高，成本低，已成為制備食源性抗氧化肽的主要方式。盡管可通過酶解工藝的優(yōu)化而獲得分子質(zhì)量相對集中的組分，但酶解產(chǎn)物中肽的種類繁多、彼此分子量比較接近，再加上活性組分的敏感性，這在很大程度上造成肽分離純化的困難，這已成為制約進一步研究活性肽結(jié)構(gòu)及功能的主要因素。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種高比活力的蠐螬酶解次級分離物。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述次級分離物的制備方法。

根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，其由包括以下步驟的方法制備：

(1)采用葡聚糖凝膠柱，以超純水為流動相，在流速為14-16mL/min、柱溫27-33℃、波長為215-225nm的條件下對蠐螬酶解液進行分離，

收集2–4min的餾分，得到初級分離物；

(2)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，，以體積比為95：5的0.1％三氟乙酸：水為流動相，在流速1mL/min、柱溫27-33℃、波長為215-225nm的條件下對初級分離物進行分離；

收集15–16min的餾分，得到次級分離物。

根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(1)選用的葡聚糖凝膠柱為葡聚糖凝膠柱G-15。

根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，所述蠐螬酶解液由包括以下步驟的方法制備得到：

(a)將蠐螬加入pH 6.8～7.2的緩沖體系中，高速勻漿，得到蟲漿液；

(b)向蟲漿液中加入脂肪酶，在38～42℃條件下酶解；

(c)將步驟(b)得到的液體滅活，靜止分層后，離心，取上清液，得到蠐螬酶解液。

根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(a)中，將蠐螬加入緩沖體系中，使蠐螬的濃度為5％。

根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(b)中，加入脂肪酶后，脂肪酶與蠐螬的比例為0.6％。

根據(jù)本發(fā)明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(b)中，酶解時間為3小時。