[發明專利]高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法

有效

• 申請號: 201910519578.0
• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110372771B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 李秀梅;石冬冬;楊培龍;張海英;聞治國;滿晨
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法。本發明通過將凝膠色譜法與反相高效液相色譜法聯用，分離蠐螬酶解液，得到次級分離物。本發明獲得餾分具有較強的抗氧化性及比活力。

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法。

背景技術

蠐螬是金龜甲總科(Scarabaeoedea)幼蟲的統稱，隸屬于鞘翅目，又名核桃蟲、地蠶、土蠶。蠐螬含有多種人類所需的氨基酸和無機元素，臨床上用于促進血液循環已有數百年歷史，現代藥理研究表明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、治療口瘡、小兒哮喘、中風、血吸蟲病肝硬化等多種藥物活性，是一種極具研究和開發價值的藥材。研究發現蠐螬的粗提物具有抗凝活性，且其中的幾種纖維蛋白(原)溶解劑具有抗血栓作用；蠐螬的乙醇和石油醚提取物具有優異的抗真菌活性。

越來越多的蛋白質水解物被發現具有抗氧化能力，新型抗氧化肽不斷被開發。抗氧化肽具有抗脂質過氧化能力和螯合金屬離子的能力，還能夠清除生物體內過量自由基。資源昆蟲養殖的興起，使昆蟲抗氧化肽的研究也隨之增多。現有技術根據不同來源的動植物蛋白的水解物所釋放出不同種類的抗氧化肽，通常采用提取法、化學水解法、酶法水解、發酵法、化學合成法、基因重組法等制備抗氧化肽。目前酶解法是最主要的生產方法，其水解易控制，可定位生產特定的肽，產品安全性極高，成本低，已成為制備食源性抗氧化肽的主要方式。盡管可通過酶解工藝的優化而獲得分子質量相對集中的組分，但酶解產物中肽的種類繁多、彼此分子量比較接近，再加上活性組分的敏感性，這在很大程度上造成肽分離純化的困難，這已成為制約進一步研究活性肽結構及功能的主要因素。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高比活力的蠐螬酶解次級分離物。

本發明的再一目的在于提供上述次級分離物的制備方法。

根據本發明的具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，其由包括以下步驟的方法制備：

(1)采用葡聚糖凝膠柱，以超純水為流動相，在流速為14-16mL/min、柱溫27-33℃、波長為215-225nm的條件下對蠐螬酶解液進行分離，

收集2–4min的餾分，得到初級分離物；

(2)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，，以體積比為95：5的0.1％三氟乙酸：水為流動相，在流速1mL/min、柱溫27-33℃、波長為215-225nm的條件下對初級分離物進行分離；

收集15–16min的餾分，得到次級分離物。

根據本發明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(1)選用的葡聚糖凝膠柱為葡聚糖凝膠柱G-15。

根據本發明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，所述蠐螬酶解液由包括以下步驟的方法制備得到：

(a)將蠐螬加入pH 6.8～7.2的緩沖體系中，高速勻漿，得到蟲漿液；

(b)向蟲漿液中加入脂肪酶，在38～42℃條件下酶解；

(c)將步驟(b)得到的液體滅活，靜止分層后，離心，取上清液，得到蠐螬酶解液。

根據本發明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(a)中，將蠐螬加入緩沖體系中，使蠐螬的濃度為5％。

根據本發明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(b)中，加入脂肪酶后，脂肪酶與蠐螬的比例為0.6％。

根據本發明具體實施方式的高比活力的蠐螬酶解次級分離物，步驟(b)中，酶解時間為3小時。