[發明專利]高比活力的蠐螬酶解次級分離物及其制備方法

有效

• 申請號: 201910519578.0
• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110372771B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 李秀梅;石冬冬;楊培龍;張海英;聞治國;滿晨
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

1.高比活力的蠐螬酶解次級分離物，其特征在于，所述次級分離物由包括以下步驟的方法制備：

（1）采用葡聚糖凝膠柱為葡聚糖凝膠柱G-15，以超純水為流動相，在流速為14 -16 mL/min、柱溫27 - 33 ℃、波長為215- 225 nm的條件下對蠐螬酶解液進行分離，梯度洗脫程序為16 min，用超純水配制濃度為10 mg/mL的蠐螬酶解液溶液，上樣量為2 mL，根據蠐螬提取物在制備色譜中的分離時間，每2 min收集一管收集2 – 4min的餾分，得到初級分離物，

所述蠐螬酶解液由包括以下步驟的方法制備得到：

（a）將蠐螬加入pH 6.8～7.2的緩沖體系中，高速勻漿，得到蟲漿液，使蠐螬的濃度為5%；

（b）向蟲漿液中加入脂肪酶，脂肪酶與蠐螬的比例為0.6%，在38～42℃條件下酶解3小時；

（c） 將步驟（b）得到的液體滅活，靜止分層后，離心，取上清液，得到蠐螬酶解液；

（2）以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，流動相為0.1%三氟乙酸-水-乙腈系統，其中，三氟乙酸-水與乙腈的體積比為95:5，在流速1 mL/min、柱溫27 - 33 ℃、波長為215- 225nm的條件下對初級分離物進行分離，

收集15 – 16 min的餾分，得到次級分離物。

2.高比活力的蠐螬酶解次級分離物的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）采用葡聚糖凝膠柱為葡聚糖凝膠柱G-15，以超純水為流動相，在流速為14 -16 mL/min、柱溫27 - 33 ℃、波長為215- 225 nm的條件下對蠐螬酶解液進行分離，梯度洗脫程序為16 min，用超純水配制濃度為10 mg/mL的蠐螬酶解液溶液，上樣量為2 mL，根據蠐螬提取物在制備色譜中的分離時間，每2 min收集一管收集2 – 4min的餾分，得到初級分離物，

所述蠐螬酶解液由包括以下步驟的方法制備得到：

（a）將蠐螬加入pH 6.8～7.2的緩沖體系中，高速勻漿，得到蟲漿液，使蠐螬的濃度為5%；

（b）向蟲漿液中加入脂肪酶，脂肪酶與蠐螬的比例為0.6%，在38～42℃條件下酶解3小時；

（c） 將步驟（b）得到的液體滅活，靜止分層后，離心，取上清液，得到蠐螬酶解液；

（2）以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，流動相為0.1%三氟乙酸-水-乙腈系統，其中，三氟乙酸-水與乙腈的體積比為95:5，在流速1 mL/min、柱溫27 - 33 ℃、波長為215- 225nm的條件下對初級分離物進行分離，

收集15 – 16 min的餾分，得到次級分離物。