[發明專利]用于鑒定莢膜紅細菌的特異性PCR引物、試劑盒和用途

有效

• 申請號: 201910516176.5
• 申請日: 2019-06-14
• 公開（公告）號: CN110241236B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 周輝;田云;劉成國;段希宇;王晶晶
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 長沙啟昊知識產權代理事務所(普通合伙) 43266
• 代理人: 張海應

本發明涉及一種用于鑒定莢膜紅細菌的特異性PCR引物、試劑盒和用途，包括如下引物對：SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物對；SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物對；及SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的引物對。本發明提供的特異性PCR引物對莢膜紅細菌特異性強，解決了傳統方法中對莢膜特異性差的問題。在利用該引物建立了鑒定莢膜紅細菌的方法，該方法具有特異性好、穩定性強和靈敏度高的優點，在檢測過程中可以很好地控制假陽性的出現，同時提高了莢膜紅細菌的檢測精確度。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體地，涉及一種用于鑒定莢膜紅細菌的特異性PCR引物、包含該引物的試劑盒和用途。

背景技術

自然環境的污染以及動物養殖過程中的抗生素耐藥問題日益嚴重，如何采用新的技術和方法促進健康和保障安全生產成為人類可持續發展與否的關鍵，同時也成為國內外研究熱點，實際上這也是生物產業進一步發展的瓶頸問題。在這一背景下，莢膜紅細菌的生理、生化特性在人類的生活和生產中起著重要的作用，在水質凈化、水產養殖、農作物以及園藝等方面均有廣泛的研究和應用。中國專利申請號為201610367225.X的一種含有莢膜紅細菌菌株的對蝦飼料及其應用中報道了將一株莢膜紅細菌作為飼料添加劑應用于對蝦養殖，大大提高了對蝦的生長速度，增強了對蝦的免疫力。中國專利申請號為2012100922031.5的一株莢膜紅細菌及其應用中報道了一株莢膜紅細菌能產生一些有機小分子，進而刺激植物生長，提高植物的抗病免疫力。中國專利申請號為2013105011364.3的一種莢膜紅細菌及其應用中報道了一株莢膜紅細菌在池塘中能分泌生物酶類，使大型藻類逐漸分解，從而控制藻類的泛濫生長，從而改善海參的養殖環境，達到提高水生生物池塘養殖產量的目的。

鑒于莢膜紅細菌的多功能性，莢膜紅細菌將會被廣泛應用于微生物肥料及飼料添加劑。為確保含莢膜紅細菌產品的使用效果，需要對這些產品中的莢膜紅細菌進行鑒定和計數。由于含有光合細菌的產品，尤其是液態產品，其顏色大多為棕紅色，很難從產品的顏色和標簽來對莢膜紅細菌進行判斷。傳統的光合細菌鑒定需要進行形態特征和生理生化試驗，操作步驟繁瑣，檢測時間較長。傳統的16S rDNA檢測有時不能將進化關系較近的物種進行有效區分，尤其在光合細菌中紅細菌屬中，傳統的16S rDNA鑒定在進行莢膜紅細菌、球形紅細菌鑒定時準確性低。因此，急需一種特異性更強的PCR方法來對莢膜紅細菌進行鑒定。截至目前，還沒有出現關于特異性PCR檢測莢膜紅細菌的報道。

發明內容

基于此，針對上述現有技術中鑒定莢膜紅細菌的方法操作步驟繁檢測時間長且特異性差的技術問題，本發明提供了一種引物，該引物對于莢膜紅細菌的特異性強，在鑒定過程中，操作簡單，檢測時間短且靈敏度高、穩定性強。

一種用于鑒定莢膜紅細菌的特異性PCR引物，包括如下引物對：

SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物對；

SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物對；

及SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的引物對。

本發明還提供了一種試劑盒，包括上述的特異性PCR引物、Taq DNA聚合酶、dNTP和DNA模板

本發明還提供了上述的特異性PCR引物或上述的試劑盒在鑒定莢膜紅細菌中的應用。

在一些實施方式中，所述應用的方法包括如下步驟：

S1、提取待測樣品的總DNA；

S2、采用權利要求1所述的特異性PCR引物對所述總DNA進行PCR擴增；

S3、對S2擴增的產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

在一些實施方式中，所述待測樣品選自光合細菌單菌落或光合細菌菌劑產品。