[發明專利]一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒

在審

• 申請號: 201910515904.0
• 申請日: 2019-06-14
• 公開（公告）號: CN110172457A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 齊存森;姜夏
• 申請（專利權）人: 洛陽愛森生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時亞娟

本發明涉及一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，屬于生物工程領域，其中全血DNA提取試劑盒主要包括裂解液、納米生物磁珠、洗滌液A、洗滌液S和洗脫液；本發明試劑盒在洗滌液A中針對性添加了去除無機鹽的成分，具有操作步驟簡單、DNA得率高、完整度好、純度高的特點。尤其是利用本發明試劑盒及試劑盒提供的操作方法，可簡單快速得到能夠直接用于二代測序的DNA樣本，尤其適用于DNA標本庫建設。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體地，涉及一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒。

背景技術

隨著分子生物學技術的發展，基因組水平上的研究已成為熱點。在分子遺傳學和分子流行病學中，無論是全基因組關聯分析(GWAS)、候選SNP位點基因分型，還是基因組文庫的建立，都需要從各類樣本中提取基因組DNA。由于血液樣本取材方便，所含基因組DNA豐富可靠，因此上述許多研究均以血液作為樣本提取完整的基因組DNA。提取純化得到的基因組DNA濃度、純度和一級結構的完整性都會影響到后續的研究，因此高效、可靠的基因組DNA提取方法是分子遺傳學基礎研究迫切需要的。

目前基因組DNA提取純化的方法有很多種，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、離心柱法和磁珠法。市場上也存在多種全血DNA提取試劑盒，但是都存在以下缺點：不能最大限度地去除蛋白、色素、脂類及其他抑制物；提取過程中使用苯酚、氯仿等有機溶劑；對血液樣品的起始體積有限制，影響適應性；提取的DNA質量不好，不適于建庫。

發明內容

為了解決現有技術中的不足，本發明的目的在于提供一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，利用所述試劑盒，操作步驟簡單，可簡單快速得到能夠直接用于二代測序的DNA樣本，且DNA得率高、完整度好、純度高，尤其適用于DNA標本庫建設。

為了實現上述目的，本發明采用的具體方案為：

一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于包含裂解液、納米生物磁珠、洗滌液A、洗滌液S和洗脫液；所述裂解液中包含異硫氰酸胍、鹽酸胍、檸檬酸三鈉和Tween20；所述納米生物磁珠為包裹有二氧化硅、聚乙烯醇、聚乙二醇或纖維素的氧化鐵；所述洗滌液A中包含十六烷基三甲基溴化銨、Tris-Hcl、無水乙醇和FMES；所述洗滌液S中包含Tris-Hcl和無水乙醇；所述洗脫液中包含Tris-Hcl和EDTA二鈉。

作為對上述方案的進一步優化，所述裂解液的PH值為5.0～7.5；所述裂解液中異硫氰酸胍的濃度為1～3mM、鹽酸胍的濃度為2～4M、檸檬酸三鈉的濃度為100～200mM、Tween20的濃度為2%～4%。

作為對上述方案的進一步優化，所述納米生物磁珠的直徑為200～3000nm，濃度為50～100mg/ml。

作為對上述方案的進一步優化，所述洗滌液A中十六烷基三甲基溴化銨的濃度為50～100mM、PH值為7.0～8.5的 Tris-Hcl的濃度為10～30mM、無水乙醇的體積百分數為30%～70%、FMES 的濃度為10～50mM。

作為對上述方案的進一步優化，所述洗滌液S中PH值為7.0～8.5的Tris-Hcl的濃度為 10～30mM、無水乙醇的體積百分數為30%～70%。

作為對上述方案的進一步優化，所述洗脫液的PH值為7.0～8.5；所述洗脫液中Tris-Hcl 的濃度為10～30mM、EDTA二鈉的濃度為0.2-0.4mM的。

作為對上述方案的進一步優化，所述試劑盒的使用方法包括以下步驟：

步驟S1：取50-200ul新鮮全血樣本于1.5ml離心管中，使用無菌移液器加入200-400ul裂解液，20～70℃水浴10～30min；

步驟S2：使用無菌移液器向離心管中加入300～500ul異丙醇和5～30ul納米生物磁珠，震蕩混勻5～10min；