[發(fā)明專利]一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910515904.0 | 申請(qǐng)日： | 2019-06-14 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110172457A | 公開（公告）日： | 2019-08-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 齊存森;姜夏 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 洛陽愛森生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 洛陽公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120 | 代理人： | 時(shí)亞娟 |
| 地址： | 471000 河南省洛陽市中國(guó)（河南）自由貿(mào)易試驗(yàn)*** | 國(guó)省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 洗滌液 全血 發(fā)明試劑 建庫 可用 生物工程領(lǐng)域 無機(jī)鹽 納米生物 標(biāo)本庫 裂解液 試劑盒 完整度 洗脫液 測(cè)序 磁珠 得率 去除 建設(shè) | ||
1.一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：包含裂解液、納米生物磁珠、洗滌液A、洗滌液S和洗脫液；所述裂解液中包含異硫氰酸胍、鹽酸胍、檸檬酸三鈉和Tween20；所述納米生物磁珠為包裹有二氧化硅、聚乙烯醇、聚乙二醇或纖維素的氧化鐵；所述洗滌液A中包含十六烷基三甲基溴化銨、Tris-Hcl、無水乙醇和FMES；所述洗滌液S中包含Tris-Hcl和無水乙醇；所述洗脫液中包含Tris-Hcl和EDTA二鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：所述裂解液的PH值為5.0～7.5；所述裂解液中異硫氰酸胍的濃度為1～3mM、鹽酸胍的濃度為2～4M、檸檬酸三鈉的濃度為100～200mM、Tween20的濃度為2%～4%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：所述納米生物磁珠的直徑為200～3000nm，濃度為50～100mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：所述洗滌液A中十六烷基三甲基溴化銨的濃度為50～100mM、PH值為7.0～8.5的 Tris-Hcl的濃度為10～30mM、無水乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為30%～70%、FMES 的濃度為10～50mM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：所述洗滌液S中PH值為7.0～8.5的Tris-Hcl的濃度為 10～30mM、無水乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為30%～70%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：所述洗脫液的PH值為7.0～8.5；所述洗脫液中Tris-Hcl 的濃度為10～30mM、EDTA二鈉的濃度為0.2-0.4mM的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于建庫的全血DNA提取試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的使用方法包括以下步驟：
步驟S1：取50-200ul新鮮全血樣本于1.5ml離心管中，使用無菌移液器加入200-400ul裂解液，20～70℃水浴10～30min；
步驟S2：使用無菌移液器向離心管中加入300～500ul異丙醇和5～30ul納米生物磁珠，震蕩混勻5～10min；
步驟S3：將經(jīng)步驟S2處理的離心管置于磁力架上45S，待納米生物磁珠完全吸附至管壁之后，使用無菌移液器吸棄上清溶液；
步驟S4：使用無菌移液器向步驟S3離心管中加入500～800ul洗滌液A，將該離心管震蕩混勻2min，置于磁力架上30s，待納米生物磁珠完全吸附至管壁之后，使用無菌移液器吸棄上清溶液；
步驟S5：使用無菌移液器向步驟S4離心管中加入500～800ul洗滌液S，將該離心管震蕩混勻2min，置于磁力架上30s，待納米生物磁珠完全吸附至管壁之后，使用無菌移液器吸棄上清溶液；
步驟S6：使用無菌移液器向步驟S5離心管中加入70～200ul洗脫液，65℃水浴5～10min，然后將離心管置于磁力架上30s，待納米生物磁珠完全吸附至管壁之后，使用無菌移液器吸取上清至新的離心管中，即獲得所需DNA。
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