[發明專利]一種雜交瘤細胞克隆化的方法在審
| 申請號： | 201910513374.6 | 申請日： | 2019-06-14 |
| 公開（公告）號： | CN110205301A | 公開（公告）日： | 2019-09-06 |
| 發明（設計）人： | 陳志強 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12N5/20 | 分類號： | C12N5/20 |
| 代理公司： | 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 許必元 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 克隆 顯微操作法 稀釋法 雜交瘤細胞克隆 雜交瘤細胞株 制備 流式細胞分選 單克隆抗體 實驗材料 單抗 保證 | ||
1.一種雜交瘤細胞克隆化的方法，其特征在于：所述克隆化的方法包括如下步驟：
(1)取一無菌平皿，加入3 mL 37 ℃預熱的DMEM完全培養基；
(2)用槍頭輕輕吹吸，重懸細胞；吸取5～10 μL細胞懸液加至平皿中；
(3)輕輕搖動平皿以混勻細胞，靜置3 min，將平皿放在倒置顯微鏡下觀察，確保視野內只有1～2個可見的細胞；
(4)尋找亮而圓的細胞，用移液搶吸取單個細胞；
(5)將吸取的單個細胞加到鋪有飼養層細胞的96孔板中；
(6)將步驟(5)中的單個細胞置37 ℃、5% CO2培養箱中培養。
2.根據權利要求1所述的一種雜交瘤細胞克隆化的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的平皿是直徑為6 cm的圓形塑料皿，且對細胞沒有吸附性。
3.根據權利要求1所述的一種雜交瘤細胞克隆化的方法，其特征在于：步驟(2)中所述的細胞為細胞融合后篩選的陽性孔內的雜交瘤細胞。
4.根據權利要求1所述的一種雜交瘤細胞克隆化的方法，其特征在于：步驟(3)中所述確保視野內只有1～2個可見的細胞是通過稀釋細胞懸液直到視野內可見1～2個細胞為止。
5.根據權利要求1所述的一種雜交瘤細胞克隆化的方法，其特征在于：步驟(4)中所述尋找亮而圓的細胞是為了保證挑選到的細胞是狀態良好的雜交瘤細胞而不是飼養層細胞或者死細胞。
6.根據權利要求1所述的一種雜交瘤細胞克隆化的方法，其特征在于：步驟(4)中所述的移液槍為10 μL的移液槍。
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