[發(fā)明專利]一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910512979.3
• 申請日: 2019-06-13
• 公開（公告）號: CN110218818B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋春元;汪聯(lián)輝;劉洋;張晶晶;蔣新宇;董晨
• 申請（專利權(quán)）人: 南京郵電大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/682;G01N21/65
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發(fā)明公開了一種登革病毒（DENV）基因片段SERS檢測試劑盒及其制備方法。本發(fā)明還公開了一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法。本發(fā)明通過測試基片上染料分子ROX的拉曼信號，實現(xiàn)對于DENV基因片段的特異性、高靈敏檢測。對于DENV基因片段檢測，第一試劑、第二試劑、第三試劑和第四試劑中的C1、L1、L2、C2、H1和H2為針對DENV基因片段設(shè)計的核苷酸序列不同的DNA鏈。本發(fā)明公開的檢測試劑盒制備簡單、檢測靈敏度高、特異性好，在登革病毒檢測等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測和光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

登革病毒屬于黃病毒科，四種不同的登革病毒類型(dengue 1，2，3，4)都能感染人體，這些血清型登革病毒可在初次感染時引起輕微發(fā)熱，并有可能發(fā)展為更嚴(yán)重的登革熱出血熱(DHF)和登革熱休克綜合征(DSS)，從而導(dǎo)致死亡。過去40年來，登革熱/登革出血熱(DEN/DHF)在全球范圍內(nèi)急劇蔓延，流行頻率和規(guī)模都在增加，迫切需要采取更有效的監(jiān)測、預(yù)防和控制措施。在DEN/DHF流行的大多數(shù)國家，沒有適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測作為評估疾病負(fù)擔(dān)的手段，也沒有足夠的蚊蟲控制或疫苗預(yù)防方案，缺乏現(xiàn)有的、可負(fù)擔(dān)的、靈敏的和具體的診斷測試是影響DEN/DHF監(jiān)測的主要障礙。對登革熱病人的早期診斷也是病人管理的關(guān)鍵，可以避免使用昂貴和無效的抗生素，快速將發(fā)熱病人分類到適當(dāng)診所，降低保健費(fèi)用。隨著抗病毒治療的快速發(fā)展，早期診斷將是確定登革熱患者的關(guān)鍵，使他們盡快得到適當(dāng)?shù)恼疹櫍±募皶r診斷也將有助于社區(qū)的病媒控制活動，從而減少其進(jìn)一步傳播。

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和單克隆抗體捕獲-酶聯(lián)免疫吸附試驗(MAC-ELISA)是目前世界范圍內(nèi)用于快速診斷登革病毒的實驗室檢測方法。然而兩種方法都易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。因此，生物傳感檢測方法因其簡便、快速、靈敏等優(yōu)勢被應(yīng)用于登革病毒的檢測，表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)被稱為超靈敏，功能強(qiáng)大且易于使用的基因檢測工具，甚至能夠?qū)崿F(xiàn)單分子檢測水平，且檢測時只需少量樣品，可提供具有非常窄特征峰的“指紋”光譜曲線，也在登革病毒檢測領(lǐng)域取得了一定的進(jìn)展。

雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR)和催化發(fā)夾組裝(CHA)是兩種經(jīng)典的無酶核酸放大策略，這兩種反應(yīng)在提高無酶生物傳感器的性能方面引起了人們的廣泛關(guān)注。HCR是2004年Dirks和Pierce首次報道一種無酶的目標(biāo)誘導(dǎo)信號放大策略，以單鏈DNA為觸發(fā)鏈，可破壞長莖保護(hù)環(huán)的能量平衡，引發(fā)交替雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，產(chǎn)生長的雙鏈DNA。催化發(fā)夾組裝(CHA)也是一種等溫?zé)o酶核酸放大技術(shù)，目標(biāo)DNA存在的情況下，可以促使兩種發(fā)夾結(jié)構(gòu)雜交形成雙鏈結(jié)構(gòu)，并釋放出目標(biāo)DNA循環(huán)使用。近年來，許多將反應(yīng)物限制在緊密的空間中用以保持局部高濃度試劑和加速反應(yīng)的模型被提出，在生物分析物檢測中有廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決技術(shù)問題是提供了一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供了登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的制備方法。

本發(fā)明最后要解決的技術(shù)問題是提供了登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法。