[發明專利]一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201910512979.3
• 申請日: 2019-06-13
• 公開（公告）號: CN110218818B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 宋春元;汪聯輝;劉洋;張晶晶;蔣新宇;董晨
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/682;G01N21/65
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒，其特征在于，所述SERS檢測試劑盒包括固相SERS基片、第一試劑、第二試劑、第三試劑和第四試劑，所述固相SERS基片是表面沉積有銀納米棒陣列的玻璃片，所述第一試劑包含L1-L2-C1結構，所述L1-L2-C1結構包括能與登革病毒基因片段堿基序列完全互補的發夾型結構C1、與C1部分互補的L1、以及能與L1部分堿基互補的修飾有巰基的L2，L1與L2形成L1-L2雙鏈，L1-L2雙鏈與C1雜交形成L1-L2-C1結構；所述第二試劑為修飾有染料分子的發夾型結構C2，所述第三試劑為修飾有染料分子的發夾型結構H1，所述第四試劑為修飾有染料分子的發夾型結構H2，其中發夾型結構H1能被C1-C2雙鏈中的C2部分堿基打開，H2能被H1部分堿基序列打開，且H2另一部分堿基序列能打開另一發夾型結構H1，從而形成交替雜交的長的H1-H2雙鏈，所述C1堿基序列如SEQ ID NO：2所示，所述L1的堿基序列如SEQ ID NO：3所示，所述L2堿基序列如SEQ ID NO：4所示；所述C2堿基序列如SEQ ID NO：5所示；所述H1的堿基序列如SEQ ID NO：6所示，所述H2堿基序列如SEQ ID NO：7所示。

2.根據權利要求1所述的登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒，其特征在于，所述SERS檢測試劑盒還包括第五試劑巰基己醇。

3.根據權利要求1~2任一項所述的登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）固相SERS基片的制備；

2）第一試劑的獲得：根據登革病毒基因片段設計并合成對應的發夾型結構C1，再根據所述C1設計并合成對應的L1，再根據L1設計并合成L2；

3）第二試劑的獲得：根據C1設計并合成發夾型結構C2；

4）第三試劑的獲得：根據所述C2設計并合成對應的發夾型結構H1；

5）第四試劑的獲得：根據H1設計并合成發夾型結構H2。

4.根據權利要求3所述的登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述C1、L1、L2、C2、H1和H2濃度相同，濃度均為1-10 μM。

5.權利要求1~2任一項所述的登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法，其不用于疾病的診斷和治療，其特征在于，包括以下步驟：

1）用超純水多次清洗試劑盒中的固相SERS基片；

2）向試劑盒的第一試劑中加入檢測樣品與第二試劑共培養；

3）向步驟2）中加入第三試劑與第四試劑得到溶液；

4）將步驟1）得到的固相SERS基片與步驟3）的溶液共培育；

5）緩沖液沖洗步驟4）得到的基片后，用第五試劑封閉基片表面；

6）純水沖洗步驟5）得到的基片后，進行SERS檢測。

6.根據權利要求5所述的一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述步驟2）中的共培養條件為24-28℃，培養1.5-2h。

7.根據權利要求5所述的一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述步驟3）培養條件為24-28℃，1.5-2h。

8.根據權利要求5所述的一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述步驟4）的培育條件為25-30℃，60%-80%濕度環境，培養3-4h。

9.根據權利要求5所述的一種登革病毒基因片段SERS檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述步驟5）的培養條件為25-30℃，60%-80%濕度環境，靜置培養10-20 min。