[發明專利]一種人血漿中卡托普利的LC-MS/MS檢測方法

在審

• 申請號: 201910509420.5
• 申請日: 2019-06-13
• 公開（公告）號: CN110243963A
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發明（設計）人: 楊勇;陳濤;陳云輝;鐘勘;陳醒;鄒小芳;史中杰;張嘉懿;譚文娟;姜金方;周茂金;陳笑艷;鐘大放
• 申請（專利權）人: 蘇州海科醫藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 蘇州唯亞智冠知識產權代理有限公司 32289
• 代理人: 張翠茹

本發明涉及一種人血漿中卡托普利的LC?MS/MS檢測方法，取在全血樣品中預先加入維生素C溶液，維生素C溶液為1.5mol·L^?1水溶液，離心獲得血漿樣品，取500μL血漿混入100μL對溴苯甲酰甲基溴溶液，對溴苯甲酰甲基溴溶液為2mg/mL乙腈溶液，反應10min后血漿置于?80℃冰箱保存待測，取50μL待測血漿樣品，混入內標溶液，內標溶液為乙腈配制成的同位素標記物卡托普利?d₃濃度為200ng/mL的溶液，再加入乙腈后渦流振蕩10min后離心，取上清液進行LC?MS/MS分析。本發明解決了卡托普利在生物樣品分析過程中不穩定的問題，提高了分析方法的準確性和可靠性，與現有技術相比具有準確度高、樣品消耗量少、靈敏度高、檢測通量高的特點。

技術領域

本發明涉及一種生物樣品中卡托普利的分析檢測方法，尤其涉及一種人血漿中卡托普利的LC-MS/MS檢測方法。

背景技術

卡托普利為競爭性血管緊張素轉換酶抑制劑，適應癥為高血壓和心力衰竭。卡托普利結構中含有一個不穩定的巰基(-SH)，易于和血漿中的蛋白半胱氨酸巰基、谷胱甘肽等含游離巰基物質發生共價結合，生成二硫化物；這一反應在體內和體外皆可發生；卡托普利在體內大約有二分之一的量被生物轉化為二硫化物；卡托普利全血或血漿等基質體外放置過程中，可以迅速發生二硫化反應，導致卡托普利濃度快速降低，容易導致人血漿中測得的卡托普利濃度偏低，進而影響藥物的安全性、有效性、一致性等評價結果；現有技術中使用對溴苯甲酰甲基溴等衍生化實際對血漿進行衍生化，但該技術未解決全血中卡托普利不穩定的問題；另外一些技術中使用強還原劑如二硫蘇糖醇，將血漿中卡托普利二硫化物轉化為卡托普利，這會使測定濃度偏高；現有技術還存在血漿用量大、檢測通量低、靈敏度低等問題。

因此，亟待開發一種樣品前處理方法，解決卡托普利在生物基質中不穩定的問題，結合LC-MS/MS檢測技術，準確的定血漿中卡托普利濃度，同時實現高通量。

發明內容

本發明目的在于提供了一種準確度高，適合大批量樣品檢測的人血漿中卡托普利的LC-MS/MS檢測方法。

為了實現上述目的，本發明提供了一種人血漿中卡托普利的LC-MS/MS檢測方法，包括以下步驟：

一種人血漿中卡托普利的LC-MS/MS檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：樣品前處理，采集血樣約3mL于含50μL維生素C溶液的抗凝管中，離心獲得血漿樣品，取500μL血漿樣品，混入100μL對溴苯甲酰甲基溴溶液，反應10min后血漿置于-80℃冰箱保存待測；取50μL待測血漿樣品，混入內標溶液，內標溶液為乙腈配制成的同位素標記物卡托普利-d3濃度為200ng/mL的溶液，再加入乙腈后渦流振蕩10min后離心，取上清液進行LC-MS/MS分析；所述內標溶液為乙腈配制成的同位素標記物卡托普利-d3濃度為200ng/mL的溶液；

S2：采用LC-MS/MS法測定待測樣品中卡托普利的濃度；

I.色譜條件：色譜柱：100×4.6mm，3.5μm；柱溫：40℃；進樣體積：2μL；流動相A：含有0.2％甲酸的2mM醋酸銨水溶液；流動相B：乙腈，采用體積比為35：65的A：B相等梯度洗脫，自動進樣器溫度為4℃，流動相的流速為1.1mL/min，其中柱后分流0.4mL/min進入質譜；

II.質譜條件：離子源：電噴霧電離源ESI；噴霧電壓5500V；離子源溫度：600℃；CUR：40psi；掃描模式：正離子多反應監測+MRM，卡托普利和卡托普利-d3離子反應分別為m/z 414.4→216.2和m/z 417.1→219.2，碰撞能量CE分別為23和25eV；