[發(fā)明專利]一種基于脾臟代謝組學(xué)研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910491370.2
• 申請日: 2019-06-06
• 公開（公告）號: CN110346464B
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周秀錦;邵宏宏;張靜;晁鐸源;宋立玲
• 申請（專利權(quán)）人: 舟山出入境檢驗檢疫局綜合技術(shù)服務(wù)中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

一種基于脾臟代謝組學(xué)研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強模型的構(gòu)建方法，涉及生物醫(yī)藥分析領(lǐng)域，包括以下步驟：1）將黑鯛幼魚分為實驗組和空白組；2）在實驗組的飼料中加入硒化氨基多糖；3）飼喂結(jié)束后幼魚進行饑餓處理，麻醉后取出脾臟組織，保存?zhèn)溆茫?）制備脾臟組織樣品和制備質(zhì)控樣品，并使用超高效液相色譜?飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進行處理；5）對收集到的代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進行處理，識別并篩選出關(guān)于硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強的脾臟代謝組學(xué)生物標(biāo)志物，并對脾臟代謝組學(xué)生物標(biāo)志物指向的代謝通路進行構(gòu)建和分析，相比于其他硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制模型構(gòu)建方法或評價方法，本發(fā)明系統(tǒng)性好，準(zhǔn)確性高，成本低，操作簡單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥分析領(lǐng)域，尤其涉及一種基于脾臟代謝組學(xué)研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

硒作為機體必需微量元素，通過硒蛋白、硒依賴酶的輔助因子等形式，在機體生長和維持機體健康方面起著重要的作用。目前研究較多的是生物毒性相對較小和易于被吸收利用的有機硒，如硒化氨基多糖。硒化氨基多糖是通過化學(xué)修飾方法將多糖與無機硒結(jié)合獲得，硒和多糖的生理活性和藥理功能得到優(yōu)化，生物活性普遍高于多糖和硒，更易于為機體吸收和利用。硒化氨基多糖可以作為增強適應(yīng)性免疫性能的潛力含硒膳食補充劑。

黑鯛(Acathopagrus schlegelii)是我國東南沿海地區(qū)及太平洋西岸海水養(yǎng)殖的經(jīng)濟魚類。脾臟是黑鯛非特異性免疫和特異性免疫的重要器官，內(nèi)含豐富的各類免疫因子，目前關(guān)于黑鯛對硒的利用已有初步研究，但關(guān)于硒化氨基多糖對黑鯛免疫調(diào)節(jié)作用的研究較少，且現(xiàn)有的研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制的評價方法存在系統(tǒng)性差，準(zhǔn)確性低，成本高，操作復(fù)雜等技術(shù)問題。

例如，文獻“不同類型硒對黑鯛幼魚生長及血清免疫指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2018(5):577-583.”，其通過對黑鯛投喂含蛋白41.57％、脂肪13.63％等氮等能基礎(chǔ)飼料(對照組)及在其中添加2.35mg/kg硒化多糖和0.88mg/kg的亞硒酸鈉(使外源硒添加量均為0.4mg/kg)的試驗飼料8周，研究了不同類型的外源硒對黑鯛幼魚生長性能、體組成和血清免疫指標(biāo)的影響。且得到了添加適量的外源硒能顯著提高黑鯛幼魚的生長性能和血清免疫活性,且有機硒的生物利用率顯著高于無機硒的試驗結(jié)果，但該評價方法存在系統(tǒng)性差，準(zhǔn)確性低，成本高，操作復(fù)雜等技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是為了克服目前現(xiàn)有的研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制的評價方法存在系統(tǒng)性差，準(zhǔn)確性低，成本高，操作復(fù)雜等技術(shù)問題，一種基于脾臟代謝組學(xué)研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強模型的構(gòu)建方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種基于脾臟代謝組學(xué)研究硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強模型的構(gòu)建方法，所述方法包括以下步驟：

1)將用于動物實驗的黑鯛幼魚隨機均分為實驗組和空白組；

2)采用相同的飼料飼喂實驗組和空白組，并在實驗組的飼料中加入硒化氨基多糖；

3)飼喂結(jié)束后將實驗組和空白組的黑鯛幼魚進行饑餓處理，并用麻醉劑麻醉后，取出脾臟組織，保存?zhèn)溆茫?/p>

4)制備脾臟組織樣品和質(zhì)控樣品，隨后使用超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進行處理，進樣時質(zhì)控樣品穿插于脾臟組織樣品之間；

5)對超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)所收集得到的黑鯛脾臟代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進行分析處理，識別并篩選出關(guān)于硒化氨基多糖對黑鯛免疫機制增強的脾臟代謝組學(xué)生物標(biāo)志物，并對脾臟代謝組學(xué)生物標(biāo)志物指向的代謝通路進行構(gòu)建和分析。

代謝組學(xué)能夠?qū)⒃嫉姆从硺悠沸畔⒌膹?fù)雜數(shù)據(jù)經(jīng)過一系列降維處理，直接反映體內(nèi)生物化學(xué)過程和狀態(tài)的變化，在系統(tǒng)研究生物內(nèi)源性小分子代謝物整體和動態(tài)改變規(guī)律上具有獨特優(yōu)勢。本發(fā)明結(jié)合利用高通量、高靈敏度、高分辨質(zhì)譜檢測技術(shù)和非靶向代謝組學(xué)方法，闡釋硒化氨基多糖對黑鯛免疫調(diào)節(jié)潛在的機制和靶標(biāo)途徑，為黑鯛免疫增強劑的開發(fā)提供參考。