[發明專利]胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法

有效

• 申請號: 201910490746.8
• 申請日: 2019-06-06
• 公開（公告）號: CN110208056B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 黃紅浪;李衛華;付莉;張維;鐘山
• 申請（專利權）人: 廈門大學附屬第一醫院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/36;C12Q1/6886;C12Q1/6837;C12Q1/6841
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 渠述華

本發明公開了一種胃癌HER?2 FISH的組織芯片制作方法，包括選取實驗材料、制作實驗組織芯片、脫蠟、去除交聯預處理、蛋白酶K消化處理、觀察細胞消化效果和重復消化、變性和雜交等步驟，通過“先劃實驗區域再切取組織切面”的選材步驟，最大限度保護蠟塊存檔的完整性；組織切面面積小，可以節省實驗試劑，減少工作量，提高工作效率和準確率；在一個玻片上鋪設多個組織切面，可以減少后續處理步驟，進一步提高工作效率，并節省檔案的存檔空間；觀察細胞消化效果的流程處理步驟少、時間短，無需鏡油和復染劑，降低成本，并避免被兩者干擾的風險，并且不存在組織破損或掉片風險。本發明可以極大的降低實驗的材料成本和人工成本，并提高工作效率和準確率。

技術領域

本發明涉及分子生物技術領域，特別是指一種胃癌HER-2 FISH 的組織芯片制作方法。

背景技術

赫賽汀聯合化療是HER-2基因陽性晚期胃癌患者的一線靶向治療方案，為患者帶來生存獲益，降低35％的死亡風險，顯著延長生存期，提高生存質量。分子生物技術的發展日新月異，為臨床靶向治療及判斷預后提供的新的思維和方向，為病人的治療提供了全新有效的方案。HER-2 FISH檢測技術是檢測HER-2基因擴增的金標準，為晚期胃癌患者的診療方案及判斷預后提供幫助，蠟塊的完整保存凸顯重要。

傳統的FISH方法是制作單片切片，相對復雜，耗時耗力，成本高,易掉片，易污染,傳統的芯片鉗取方法嚴重破壞了蠟塊的完整性。目前常用的組織芯片制作機主要由打孔針及距離調節器構成，通過專業技術手段把最有價值的組織從蠟塊里取出后再按一定順序排列做成組織芯片。這樣的做法優點是快速，大批量。但同樣缺陷是會破壞蠟塊的完整性，特別是微小癌標本。

并且不同類型胃癌標本存在著明顯的異質性，蛋白酶K消化細胞核的時間存在明顯差異，簡單的使用同樣的消化時限無法取得理想精確診斷結果。

發明內容

本發明的目的在于提供一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，實現保持蠟塊的完整性，并降低實驗的材料成本和人工成本，提高工作效率和準確率。

為了達成上述目的，本發明的解決方案是：

一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，包括以下步驟：

步驟1、選取實驗材料

從IHC的HER-2染色的對照切片中選取典型陽性腫瘤細胞集中的對照區域,對比對照區域在蠟塊上劃出相應的實驗區域，并切取組織切面；所述實驗區域的形狀為面積小于10mm²的方形；

步驟2、制作實驗組織芯片

將切取的若干個組織切面根據統籌歸類，把同類型的若干個不同標本的組織切面鋪設在同一玻片上，制成實驗組織芯片；

步驟3、將實驗組織芯片進行脫蠟處理；

步驟4、將實驗組織芯片進行去除交聯預處理；

步驟5、將實驗組織芯片進行蛋白酶K消化處理；

步驟6、觀察實驗組織芯片的細胞消化效果和重復消化

日常室內光線下，在實驗組織芯片的各組織切面上分別覆蓋去離子水，使用40倍物鏡白光鏡下分別觀察每個組織切面，如果細胞形態結構清晰，細胞核突顯，核內透亮，染色質/體呈清晰小黑點分布于細胞核內，胞質透亮，細胞膜變透明，則判斷為消化到位；對于消化不到位的組織切面，直接去除其表面的去離子水，平放在水浴箱的濕盒中，用移液槍量取適量蛋白酶K工作液，滴加在消化不到位的組織切面上，反復2-3次，3min/次，再觀察細胞消化效果，直至實驗組織芯片上的組織切面全部消化到位；

步驟7、變性和雜交

在暗室中，在組織切面上滴加探針混合物，加蓋蓋玻片，并用軟質膠封邊，再進行變性和雜交處理。