[發(fā)明專利]胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910490746.8
• 申請日: 2019-06-06
• 公開（公告）號: CN110208056B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設計）人: 黃紅浪;李衛(wèi)華;付莉;張維;鐘山
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/36;C12Q1/6886;C12Q1/6837;C12Q1/6841
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 渠述華

1.一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1、選取實驗材料

從IHC的HER-2染色的對照切片中選取典型陽性腫瘤細胞集中的對照區(qū)域,對比對照區(qū)域在蠟塊上劃出相應的實驗區(qū)域，并切取組織切面；所述實驗區(qū)域的形狀為面積小于10mm²的方形，其相鄰兩邊互不接觸；

步驟2、制作實驗組織芯片

將切取的若干個組織切面根據(jù)統(tǒng)籌歸類，把同類型的若干個不同標本的組織切面鋪設在同一玻片上，制成實驗組織芯片；

步驟3、將實驗組織芯片進行脫蠟處理；

步驟4、將實驗組織芯片進行去除交聯(lián)預處理；

步驟5、將實驗組織芯片進行蛋白酶K消化處理；

步驟6、觀察實驗組織芯片的細胞消化效果和重復消化

日常室內(nèi)光線下，在實驗組織芯片的各組織切面上分別覆蓋去離子水，使用40倍物鏡白光鏡下分別觀察每個組織切面，如果細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，細胞核突顯，核內(nèi)透亮，染色質(zhì)/體呈清晰小黑點分布于細胞核內(nèi)，胞質(zhì)透亮，細胞膜變透明，則判斷為消化到位；對于消化不到位的組織切面，直接去除其表面的去離子水，平放在水浴箱的濕盒中，用移液槍量取適量蛋白酶K工作液，滴加在消化不到位的組織切面上，反復2-3次，3min/次，再觀察細胞消化效果，直至實驗組織芯片上的組織切面全部消化到位；

步驟7、變性和雜交

在暗室中，在組織切面上滴加探針混合物，加蓋蓋玻片，并用軟質(zhì)膠封邊，再進行變性和雜交處理。

2.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟1中，實驗區(qū)域的形狀為3×3mm²的方形。

3.如權(quán)利要求2所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟1中，實驗區(qū)域的相鄰兩邊的端部距離為0.5mm。

4.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：所述步驟1中，組織切面的厚度為3.5-4μm。

5.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟2中，將組織切面按照胃癌分型、IHC結(jié)果、細胞形態(tài)及大小進行統(tǒng)籌歸類。

6.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟2中，將6個不同標本的組織切面鋪設在同一玻片上。

7.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟3中，將實驗組織芯片在62℃烤箱中放置18-20小時后，將實驗組織芯片浸泡在室溫的二甲苯中3次，10min/次；在100%乙醇、85%乙醇、70%乙醇中各浸泡1次，3min/次，再用去離子水洗滌1min。

8.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟4中，將實驗組織芯片在80℃的NaSCN液中浸泡20-30min后，在室溫的去離子水中浸泡2次，3min/次；上述NaSCN液的體積為10-15ml。

9.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟5中，將實驗組織芯片放入預熱好的蛋白酶K工作液中，在37℃下孵育10-60min后，用去離子水漂洗2次，5min/次。

10.如權(quán)利要求1所述的一種胃癌HER-2 FISH的組織芯片制作方法，其特征在于：

所述步驟7中，變性的條件為78℃，5min；雜交的條件為37℃，16-20h。