[發明專利]一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法在審
| 申請號： | 201910485738.4 | 申請日： | 2019-06-05 |
| 公開（公告）號： | CN110184333A | 公開（公告）日： | 2019-08-30 |
| 發明（設計）人： | 黃拔嚴;張彥偉 | 申請（專利權）人： | 北京益序醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738 | 代理人： | 黃錦陽 |
| 地址： | 100000 北京市昌平區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 熔解曲線分析 缺失檢測 口腔脫落細胞 采集 制備 判定 核酸提取 離心分層 目標基因 熔解曲線 實驗步驟 細胞采集 熒光通道 分析 漱口 對設備 基因型 進口腔 臉頰 單步 單管 峰型 緊靠 拭子 引物 重懸 涮洗 沉淀 清水 合成 細胞 | ||
1.一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法，包括步驟一，模板的制備；步驟二，引物的合成與準備；步驟三，結果的判定；其特征在于：
其中在上述步驟一中，模板的制備包括以下步驟：
1)用清水漱口后，采集口腔脫落細胞；
2)用1mL TE將細胞涮洗下來，進行離心分層；
3)棄上清，沉淀用50μL TE重懸，即可作為模板；
其中在上述步驟二中，引物的合成與準備包括以下步驟：
1)PCR引物序列：
①GSTM1-F GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC；
②GSTM1-R GTTGGGCTCAAATATACGGTGG；
③BCL2-F GCAATTCCGCATTTAATTCATGG；
④BCL2-R GAAACAGGCCACGTAAAGCAAC；
2)PCR體系：
①5ul的Talent qPCR Premix反應液2個；
②2ul的引物混合液；
③1ul的模板；
④2ul的水；
3)PCR程序：
①95℃，10min；
②95℃，5s，63℃，25s，72℃，20s，38個循環；
③95℃，10s；65℃，60s；溫度緩慢且勻速的升至98℃，每攝氏度采集五個數據點；
其中在上述步驟三中，根據熔解曲線的峰型判定基因型。
2.根據權利要求1所述的一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法，其特征在于：所述步驟一1)中，采集時將口腔脫落細胞采集拭子伸進口腔壁，緊靠臉頰內側上下刮拭30～40次。
3.根據權利要求1所述的一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法，其特征在于：所述步驟一2)中，離心速度為4000r/min，離心5min。
4.根據權利要求1所述的一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法，其特征在于：所述步驟二2)中，Talent qPCR Premix反應液的型號為FP209。
5.根據權利要求1所述的一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法，其特征在于：所述步驟二3)中，升溫速度為0.2℃/s。
6.根據權利要求1所述的一種基于熔解曲線分析的GSTM1基因缺失檢測方法，其特征在于：所述步驟三中，峰型判定包括：
1)僅在位置1出現峰，缺失型；
2)在位置1和2出現峰，正常型；
3)在位置1未出現峰，實驗出錯，需復核。
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