[發(fā)明專利]產(chǎn)多種酶類的解淀粉芽孢桿菌菌株GUTU06及其篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910484374.8
• 申請(qǐng)日: 2019-06-05
• 公開（公告）號(hào): CN110438027B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何臘平;蘭光群;李翠芹;楊運(yùn);黃露
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02;C12N9/54;C12R1/07
• 代理公司: 貴陽(yáng)中新專利商標(biāo)事務(wù)所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

1.一種產(chǎn)多種酶類的解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）菌株GUTU06，其特征在于：保藏編號(hào)為CCTCC M 2019234。

2.一種利用如權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌菌株GUTU06制備納豆激酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）粗酶液制備

將解淀粉芽孢桿菌菌株GUTU06劃線接種到酪蛋白平板培養(yǎng)基上37 ℃培養(yǎng)活化24 h，活化兩次后，挑取透明圈較大的單菌落接種到液體種子液培養(yǎng)基中，于 37 ℃、180 r/min培養(yǎng)18 h后既得發(fā)酵種子液；挑選顆粒飽滿、無(wú)畸形、色澤淡黃的市售有機(jī)黃豆，用去離子水沖洗，直至無(wú)雜物，將黃豆按照量比1∶4加入水中浸泡18 h后，瀝干水；將濕豆在0.1MPa下蒸汽滅菌蒸煮15-30min，然后在無(wú)菌條件下自然冷卻至室溫；將發(fā)酵種子液按質(zhì)量百分比4%的接種量接種到冷卻好的黃豆上，37 ℃培養(yǎng)36 h，每12 h搖晃一次，培養(yǎng)獲得納豆；將培養(yǎng)完成的納豆與水按照1:9的料液比單位g/ml均質(zhì)后，在4 ℃下提取24 h，后于4℃、12000r/min離心10 min，獲得粗酶液；

2）丙酮沉淀納豆激酶

在冰浴和磁力攪拌下，將5倍體積的丙酮緩慢注入粗酶液中，在 0 ℃下沉淀 6 h，獲得含納豆激酶的蛋白沉淀；

3）前萃取納豆激酶

將丙酮沉淀的納豆激酶沉淀溶于水相中，得到含納豆激酶的水相，將水相與有機(jī)相等體積混合，萃取離心后，得到含有納豆激酶的有機(jī)相；

4）反膠束反萃取納豆激酶

將前萃取得到的含有納豆激酶的有機(jī)相與反萃水相等體積混合，進(jìn)行反應(yīng)萃取，使納豆激酶從有機(jī)相轉(zhuǎn)移到反萃水相；

5）純化后納豆激酶的濃縮及脫鹽

將反膠束萃取完成后的酶液用丙酮沉淀兩次，收集得到納豆激酶沉淀，將納豆激酶沉淀加入TEAB中，冰浴超聲后離心，棄上清得到濃縮脫鹽后的納豆激酶純酶。