[發(fā)明專利]一種沉香數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910477584.4
• 申請(qǐng)日: 2019-06-03
• 公開（公告）號(hào): CN110221012B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳惠勤;黃芳;黃曉蘭;羅輝泰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省測(cè)試分析研究所(中國(guó)廣州分析測(cè)試中心)
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;莫瑤江

本發(fā)明公開了一種沉香數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜的構(gòu)建方法。該方法采用高效液相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定沉香提取物，得到液相色譜圖和高分辨質(zhì)譜的總離子流色譜圖，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間以及每個(gè)色譜峰對(duì)應(yīng)的高分辨質(zhì)譜的精確質(zhì)量數(shù)表征沉香中每個(gè)化學(xué)成分，即為每個(gè)成分給出具有唯一性的數(shù)字信息，以數(shù)字化的形式來表征化學(xué)成分，由此建立沉香的數(shù)字化的HPLC?UV/TOF MS色譜/高分辨質(zhì)譜指紋圖。本發(fā)明提供的方法對(duì)沉香的每種化學(xué)成分給出了類似于身份認(rèn)定的數(shù)字化信息，具有唯一性，能全面反映沉香的物質(zhì)成分，實(shí)現(xiàn)對(duì)沉香的全面、科學(xué)的表征。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種沉香數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

目前中藥材存在以下問題：一是《中國(guó)藥典》規(guī)定的中藥材的鑒定大都采用薄層色譜和液相色譜法，只能通過保留時(shí)間判定，結(jié)果不夠準(zhǔn)確；二是中藥的發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)是化學(xué)成分，但目前還有很多成分未弄清楚，不能給出各個(gè)色譜峰對(duì)應(yīng)化學(xué)成分的定性數(shù)據(jù)，給中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制帶來困難，影響中藥的現(xiàn)代化進(jìn)程。

沉香由瑞香科植物白木香樹產(chǎn)生，主產(chǎn)地在中國(guó)南方及東南亞，是一種珍貴的中藥材。國(guó)內(nèi)外對(duì)沉香的化學(xué)成分分析的相關(guān)報(bào)道較少，《中國(guó)藥典》中沉香的定量指標(biāo)僅為沉香四醇，然而沉香的藥效還有很多成分共同發(fā)揮作用，需要一種可以對(duì)沉香的其他化學(xué)成分進(jìn)行全面、科學(xué)表征的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種沉香數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法對(duì)每個(gè)色譜峰給出保留時(shí)間和精確質(zhì)量數(shù)信息(精確到小數(shù)點(diǎn)后第4位)，相當(dāng)于每個(gè)色譜峰給出類似于認(rèn)定身份證明的唯一信息，從而實(shí)現(xiàn)成分的識(shí)別。獲得的沉香指紋圖譜能全面、準(zhǔn)確地表征沉香的化學(xué)成分，對(duì)沉香的每個(gè)化學(xué)物質(zhì)提供數(shù)字化的唯一性信息。

本發(fā)明的沉香數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括以下步驟：采用高效液相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定沉香提取物，同時(shí)得到液相色譜圖和高分辨質(zhì)譜的總離子流色譜圖，通過高分辨質(zhì)譜為色譜圖中的每個(gè)色譜峰標(biāo)上精確質(zhì)量數(shù)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間以及每個(gè)色譜峰對(duì)應(yīng)的精確質(zhì)量數(shù)表征沉香中每個(gè)化學(xué)成分，構(gòu)建沉香的數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜；并根據(jù)各個(gè)峰的精確質(zhì)量數(shù)推測(cè)出分子式，然后結(jié)合其二級(jí)質(zhì)譜碎片離子和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)，共鑒定出27個(gè)化學(xué)成分。

上述的沉香數(shù)字化色譜/質(zhì)譜指紋圖譜的構(gòu)建方法中，是根據(jù)液相色譜圖和高分辨質(zhì)譜的總離子流色譜圖得到色譜峰的保留時(shí)間，根據(jù)每個(gè)色譜峰對(duì)應(yīng)的高分辨質(zhì)譜圖的精確質(zhì)荷比確定每個(gè)色譜峰的精確質(zhì)量數(shù)。

所述的高效液相色譜條件為：色譜柱：Phenomenex luna C18色譜柱，柱長(zhǎng)為25cm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm，流速為每分鐘0.7mL；流動(dòng)相：乙腈為流動(dòng)相A，以0.1％甲酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫程序按A的變化為：0min，15％；10min，20％；19min，23％；21min，33％；39min，33％，40min，35％；50min，35％，50.1min，95％；60min，95％；66min，15％，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為252nm。

所述的質(zhì)譜條件為：離子源為Agilent雙噴Jet Stream源，正離子模式采集，干燥氣溫度350℃，霧化氣壓力40psi，干燥氣溫度325℃，流速8L/min，鞘氣溫度350℃，流速11L/min，毛細(xì)管電壓3000V，毛細(xì)管出口電壓110V，錐孔電壓65V，八極桿電壓750V，采集模式為自動(dòng)MS/MS，掃描范圍m/z 80～1100；參比離子正離子為：m/z 121.0509、922.0098。

所述的沉香提取物的制備包括以下步驟：將沉香藥材粉碎，精密稱定0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇10mL，稱定重量，浸泡0.5小時(shí)，在功率250W，頻率40kHz的超聲條件下處理1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，得到沉香提取物。

本發(fā)明的有益效果為：