[發明專利]一種快速檢測IBV二溫式納米PCR試劑盒及應用

在審

• 申請號: 201910476504.3
• 申請日: 2019-06-03
• 公開（公告）號: CN110066890A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發明（設計）人: 磨美蘭;張文;韋蘭萍;陳基明;范文勝;韋平
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 成都四合天行知識產權代理有限公司 51274
• 代理人: 馮龍;王記明

1.一種快速檢測IBV二溫式納米PCR試劑盒，其特征在于，該快速檢測IBV的二溫式納米PCR試劑盒包括：2×Nano buffer，Taq DNA聚合酶，10×loading buffer，根據IBV 3′端非編碼區保守區域設計的一對特異性引物，無陽性核酸ddH₂O以及陽性質粒；特異性引物的上游引物為：5′-GAGAGGAACAATGCACAGC-3′，下游引物為：5′-CATTTCCCTGGCGATAGAC-3′。

2.根據權利要求1所述的一種快速檢測IBV二溫式納米PCR試劑盒，其特征在于，該快速檢測IBV的二溫式納米PCR試劑盒在制備檢測IBV試劑中的應用。

3.根據權利要求2所述的一種快速檢測IBV二溫式納米PCR試劑盒，其特征在于，二溫式納米PCR試劑盒在制備檢測IBV中的應用，檢測IBV包括以下步驟：從病雞組織或含毒的尿囊液中提取病毒核酸，將病毒RNA反轉錄為cDNA，然后在二溫式納米PCR反應體系進行擴增目的片段，7μL納米PCR擴增產物與1μL 10×loading buffer液混合，用1.5%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，試劑盒所帶的陽性質粒作為對照；其中納米PCR反應體系為：2×Nano buffer 6μL，上游引物0.6μL，下游引物0.6μL，cDNA 1μL，Taq DNA聚合酶0.2μL，補足ddH₂O至12μL；擴增體系為：94℃預變性3分鐘；94℃變性15秒，57℃退火及延伸兩步共15秒，循環30次；最后72℃延伸3分鐘；所述的檢測是非診斷目的的。