[發明專利]鑒定香菇申香215菌種及其實質性派生品種的單核體交配型的引物組，鑒定方法和應用

有效

• 申請號: 201910475026.4
• 申請日: 2019-05-31
• 公開（公告）號: CN110029191B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 張美彥;章爐軍;尚曉冬;宋春艷;于海龍;徐珍;王瑞娟;劉建雨;楊慧;譚琦
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 劉蘭

本發明公開了鑒定香菇申香215菌種及其實質性派生品種的單核體交配型的引物組，鑒定方法和應用，涉及食用菌分子標記輔助育種技術領域，具體包括四對引物，鑒定方法具體包括：菌絲培養、基因組DNA的快速制備、交配型的PCR檢測、電泳檢測確定結果。本發明與常規單核體交配型鑒定的方法相比，具有檢測時間短、準確性高的優點，利用本發明的鑒定方法，可以極大縮短鑒定時間，降低誤檢率，排除雙核體。

技術領域

本發明涉及食用菌分子標記輔助育種技術領域，具體而言，涉及鑒定香菇申香215菌種及其實質性派生品種的單核體交配型的引物組，鑒定方法和應用。

背景技術

單核體的獲取及其交配型鑒定是香菇遺傳、育種研究的基礎性工作之一。交配型決定著進行雜交的兩個單核體親本之間的可親和性，不可親和的單核體之間不能雜交形成雙核體后代。

目前，香菇交配型鑒定通常采用單核體兩兩對峙培養后顯微鏡檢觀察鎖狀聯合的方式進行。雜交育種工作往往涉及大量的單核體，而單核體之間對峙培養的組合較多造成接種和鏡檢的工作量大，耗時長。此外，鏡檢過程中由于鎖狀聯合的形成時間早晚，挑取菌落的時間和部位不同等易產生人為誤檢，對后續試驗造成影響。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種鑒定香菇申香215菌種的單核體交配型的引物組。該引物通過擴增可以快速鑒定出香菇申香215菌株的單核體交配型。

本發明的第二目的在于提供一種使用引物鑒定香菇申香215菌種的單核體交配型的方法。與現有的鑒定方法相比，該方法操作方便，鑒定準確率高，鑒定周期短。

本發明的第三目的在于提供一種鑒定香菇申香215菌種實質性派生品種的單核體交配型的引物。該引物可以實現香菇申香215菌種實質性派生品種的單核體交配型鑒定。

本發明的第四目的在于提供一種鑒定香菇申香215菌種的單核體交配型的引物組在分子標記，試劑盒和試紙條中的應用。

本發明是這樣實現的：

一種鑒定香菇申香215菌種的單核體交配型的引物組，其包括如下第一至第四引物對的任意一種或多種；

其中，第一引物對包括：SEQ ID NO.1-2所示的引物；第二引物對包括：SEQ IDNO.3-4所示的引物；第三引物對包括：SEQ ID NO.5-6所示的引物；第四引物對包括：SEQ IDNO.7-8所示的引物。

進一步地，本發明中的4對引物是基于香菇申香215交配因子A和B區域的SNP位點開發的AS-PCR引物。

一種鑒定香菇申香215菌種的單核體交配型的方法，其包括：使用第一至第四引物對分別對待測樣品的DNA模板進行PCR擴增。

進一步地，上述鑒定方法還包括菌絲培養和基因組DNA的提取步驟。其中菌絲培養具體包括將香菇申香215單核體菌株轉接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基PDA中，在23℃~25℃下避光靜置培養。

基因組DNA的快速制備具體包括如下依次進行的步驟：待菌絲萌發后用滅菌的牙簽或者接種針尖端挑取少量菌絲，將菌絲懸浮于裝有80-120μL TE buffer的0.2ml離心管中，在PCR儀上96-98℃保溫4-8min后，立即置于冰上冷卻后備用。若制備較大量的菌絲時可采用96孔板做為菌絲容器。

進一步地，第一對引物和第二對引物的擴增長度均為506bp，第三對引物和第四對引物的擴增長度為1383bp。

進一步地，第一對引物和第二對引物用于檢測A因子，第三對引物和第四對引物用于檢測B因子。

在發明應用較佳的實施例中，上述待測樣品的DNA模板為待測樣品的基因組DNA。