[發(fā)明專利]鑒定香菇申香215菌種及其實(shí)質(zhì)性派生品種的單核體交配型的引物組，鑒定方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910475026.4
• 申請(qǐng)日: 2019-05-31
• 公開（公告）號(hào): CN110029191B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張美彥;章爐軍;尚曉冬;宋春艷;于海龍;徐珍;王瑞娟;劉建雨;楊慧;譚琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 劉蘭

1.一種鑒定香菇申香215菌種及其實(shí)質(zhì)性派生品種的單核體交配型的引物組，其特征在于，所述引物組包含第一引物對(duì)、第二引物對(duì)、第三引物對(duì)和第四引物對(duì)；

其中，第一引物對(duì)具有如SEQ ID NO.1-2所示的引物；第二引物對(duì)具有如SEQ ID NO.3-4所示的引物；第三引物對(duì)具有如SEQ ID NO.5-6所示的引物；第四引物對(duì)具有如SEQ IDNO.7-8所示的引物；所述引物組對(duì)應(yīng)的單核體交配型的分析方法為：若第一引物對(duì)和第三引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第二引物對(duì)和第四引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A1B1；若第一引物對(duì)和第四引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第二引物對(duì)和第三引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A1B2；若第二引物對(duì)和第三引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第一引物對(duì)和第四引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A2B1；若第二引物對(duì)和第四引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第一引物對(duì)和第三引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A2B2；若第一至第四引物均有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A1A2B1B2的雙核體。

2.一種鑒定香菇申香215菌種的單核體交配型的方法，其特征在于，其包括：使用權(quán)利要求1所述的第一至第四引物對(duì)分別對(duì)待測(cè)樣品的DNA模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

所述方法還包括交配型的分析，所述交配型的分析方法為：若第一引物對(duì)和第三引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第二引物對(duì)和第四引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A1B1；若第一引物對(duì)和第四引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第二引物對(duì)和第三引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A1B2；若第二引物對(duì)和第三引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第一引物對(duì)和第四引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A2B1；若第二引物對(duì)和第四引物對(duì)均有擴(kuò)增產(chǎn)物，而第一引物對(duì)和第三引物對(duì)均沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A2B2；若第一至第四引物均有擴(kuò)增產(chǎn)物，則判斷交配型為A1A2B1B2的雙核體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)樣品的DNA模板為待測(cè)樣品的基因組DNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：將擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳鑒定；所述電泳鑒定具體包括在擴(kuò)增產(chǎn)物或凝膠中添加熒光染料進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的條件為：在94-98℃預(yù)變性1-6min，94-95℃變性1-1.5min，第一引物對(duì)和第二引物對(duì)的退火溫度均為61-61.5℃，第三引物對(duì)和第四引物對(duì)的退火溫度均為61-63℃，退火時(shí)間為20s-90s，70-72℃延伸20-90s，29-42個(gè)循環(huán)，最后在70-72℃保溫0-10min。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的條件為：在94℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，第一引物對(duì)和第二引物對(duì)的退火溫度均為61℃，第三引物對(duì)和第四引物對(duì)的退火溫度均為63℃，退火時(shí)間為60s，72℃延伸60s，35個(gè)循環(huán)，最后在72℃保溫5min。

7.一種使用權(quán)利要求1所述的引物組制得的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括多個(gè)檢測(cè)試劑，多個(gè)所述檢測(cè)試劑中分別添加有第一至第四引物對(duì)。

8.一種使用權(quán)利要求1所述的引物組制得的試紙條，其特征在于，所述試紙條上包被有第一至第四引物對(duì)。