[發(fā)明專利]雞骨香揮發(fā)油抗腫瘤活性及其相關(guān)機(jī)制的測試方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910472431.0
• 申請日: 2019-05-31
• 公開（公告）號: CN110208515A
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉超;孫金月;張瑞瑞;王青;程安瑋;王新坤;郭溆
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/535;G01N33/533;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562
• 代理人: 牟炳彥

本發(fā)明屬于醫(yī)藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種雞骨香揮發(fā)油抗腫瘤活性及其相關(guān)機(jī)制的測試方法及應(yīng)用，所述雞骨香揮發(fā)油抗腫瘤活性及其相關(guān)機(jī)制的測試方法為：依次進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測，Hoechst 33258染色，線粒體膜電位染色，活性氧種類測定，實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，蛋白質(zhì)印跡分析（Image J灰度分析定量），數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。本發(fā)明表明雞骨香揮發(fā)油通過線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源途徑誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡，能誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡，是一種潛在的抗癌藥物；因此，這些證據(jù)表明雞骨香揮發(fā)油可作為一種新型化學(xué)預(yù)防或化學(xué)治療劑用于癌癥的治療，為進(jìn)一步開發(fā)用于臨床分析的藥物提供依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種雞骨香揮發(fā)油抗腫瘤活性及其 相關(guān)機(jī)制的測試方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前，最接近的現(xiàn)有技術(shù)：

揮發(fā)油是從植物中獲得的天然化合物，其成分因其相對安全的狀態(tài)，消費(fèi) 者的廣泛接受以及對潛在功能用途的探索而越來越受到關(guān)注[1-3]。揮發(fā)油通常 成為評估傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)療效的重要指標(biāo)[4]。從植物中提取的約300種揮發(fā)油在農(nóng)業(yè)， 食品，化妝品和健康產(chǎn)業(yè)中很重要[5]。癌癥是一個(gè)主要的公共衛(wèi)生問題，是心 血管疾病之后的第二大全球性疾病。根據(jù)美國癌癥協(xié)會的統(tǒng)計(jì)，美國總共估計(jì) 有1,685,210例新發(fā)癌癥病例，2016年約有600,000例死亡病例[6]。迫切需要發(fā) 現(xiàn)高效且具有低毒性的新型治療藥物。

巴豆屬屬于大戟科，由大約1300種物種組成，廣泛分布于熱帶和亞熱帶地 區(qū)[7]。該屬植物是多種結(jié)構(gòu)類型二萜的豐富來源，包括具有廣泛生物活性的 clerodane，trachlobane，kaurane，crotofolane和pimarane，對人類健康是有益處 的。此外，三萜類化合物，黃酮類化合物和生物堿也曾在巴豆中發(fā)現(xiàn)[8]。

Croton crassifolius Geisel屬于巴豆屬，是一種經(jīng)濟(jì)上重要的草本植物，廣泛種植于中國廣東，福建和海南省，作為中藥的商業(yè)生產(chǎn)[8]。自古以來，它的根 源，在中國被稱為“雞骨香”，已被用于處方治療胃痛，風(fēng)濕病，喉嚨痛和癌癥。 在先前分析C.Crassifolius根的化學(xué)成分的分析中，鑒定了不同類型的二萜，根 據(jù)它們的結(jié)構(gòu)類型可分為clerodane，daphnane和tigliane型[9,10]。

植物內(nèi)活性物質(zhì)決定了植物的功效，前期與C.crassifolius相關(guān)的大量研究 基本上都集中于中極性提取物成分研究，而對于C.crassifolius內(nèi)的揮發(fā)性成分 研究甚少，僅有很少的研究對比分析了超臨界萃取與水蒸氣蒸餾獲得的雞骨香 萃取物的抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，對于雞骨香二氧化碳超臨界萃取物的成分， 以及抗腫瘤作用的機(jī)制尚未報(bào)道。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：

(1)雞骨香CO₂超臨界萃取物所含的具體成分尚不清楚；

(2)雞骨香CO₂超臨界萃取物盡管之前報(bào)道過能夠抑制腫瘤細(xì)胞增長，但 是對于人正常細(xì)胞的作用如何尚不清楚；

(3)雞骨香CO₂超臨界萃取物盡管之前報(bào)道過能夠抑制腫瘤細(xì)胞增長，但 是具體的作用機(jī)制如：阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)細(xì)胞自噬等尚未有 人研究。

解決上述技術(shù)問題的難度：揮發(fā)性成分結(jié)構(gòu)類型非常復(fù)雜，且化合物之間 的區(qū)別較小，不易分離，通過GC-MS分析，僅僅進(jìn)行簡單的保留時(shí)間比對很難 準(zhǔn)確鑒定單個(gè)成分。結(jié)合多種分析手段(正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品分析，MS片段分析等)， 對獲得的超臨界萃取物進(jìn)行成分鑒定難度較大。

解決上述技術(shù)問題的意義：