[發明專利]一種O抗原親和介質及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910471792.3
• 申請日: 2019-05-31
• 公開（公告）號: CN110172087B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 張松平;蘇志國;楊延麗;尤星力
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C07K14/255
• 分類號: C07K14/255;B01J20/286;B01J20/30;B01D15/38;C07K16/12;G01N33/543;G01N33/569
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本發明提供了一種O抗原親和介質及其制備方法和應用，所述O抗原親和介質包括超大孔介質和沙門氏菌的O抗原，所述O抗原化學固定在超大孔介質表面。本發明的O抗原親和基質制備過程簡單，純化操作簡便，效率高，利用該親和介質和純化方法制備出的抗體對O抗原具有高特異性，可用于輔助沙門氏菌診斷等應用。

技術領域

本發明屬于免疫分析領域，涉及一種親和層析介質及其制備方法和應用，尤其涉及一種O抗原親和介質及其制備方法和應用。

背景技術

雞白痢、雞傷寒、副傷寒、仔豬副傷寒等是由沙門氏菌引起的動物疾病，導致禽業的重大經濟損失。沙門氏菌是一種革蘭氏陰性菌，是細菌性食物中毒的重要致病菌，部分沙門氏菌還出現了人畜共患的現象，甚至導致感染和死亡，引起了高度關注。

雞白痢、雞傷寒等禽病的防控手段中最主要和根本的方法是淘汰病禽，凈化根除，封閉飼養。禽病種類多且呈現群發性，因此關鍵在于在疫病發生的早期進行快速準確的診斷，避免病情的延誤和擴大，而這有賴于診斷技術的水平和條件。目前已經有大量研究致力于開發沙門氏菌的診斷技術，例如傳統方法全血玻板凝集試驗(PAT)、PCR擴增檢測、采用膠體金試劑卡檢測抗原、ELISA方法測定抗體等。

CN106086209A公開了一種快速鑒定雞白痢和雞傷寒沙門菌的PCR檢測試劑盒。所述試劑盒中包括flhB基因檢測引物，該發明的試劑盒能快速高通量鑒定雞白痢/傷寒沙門菌，可作為沙門菌傳統血清學分型的輔助方法。

CN107860911A公開了致病性沙門氏菌測試條的制備方法，所述測試條包括基材PVC、玻璃纖維和硝酸纖維膜，基材PVC板上固定有第一覆膜、引水玻璃纖維、載體玻璃纖維、硝酸纖維膜和吸水棉漿板，硝酸纖維膜上包被有檢測區和質控區，引水玻璃纖維和載體玻璃纖維上覆蓋有第二覆膜，吸水棉漿板上覆蓋有第三覆膜；制備方法：制備純化的單克隆抗體、制備膠體金顆粒、制備標記物、包被纖維膜、組裝測試條；測試條采用膠體金免疫層析檢測法，將免疫反應的特異性、層析方法的快速性、以及膠體金顆粒作為示蹤物的直觀性等諸多優點結合在一起，實現對致病性沙門氏菌簡便快速檢測。

CN106093409A公開了基于沙門氏菌核心多糖單克隆抗體SQX6D8的檢測食品中沙門氏菌屬的膠體金試紙條的制備方法，以高碘酸鈉法合成的鼠傷寒沙門氏菌脂多糖(LPS)與牛血清白蛋白(BSA)的偶聯物作為膠體金試紙條測試線(T線)的包被原，以沙門氏菌核心多糖單克隆抗體SQX6D8作為金標抗體。該沙門氏菌膠體金試紙條方法采用間接競爭原理進行檢測，并且沙門氏菌屬核心多糖特異性單克隆抗體保證了方法對屬內沙門氏菌均有交叉同時對屬外細菌無交叉反應，為食品中沙門氏菌屬的全面、簡便、快速檢測提供了分析手段。

在以上方法中，抗原抗體反應的ELISA方法或膠體金試劑卡方法的診斷技術在操作簡便性和靈敏度上都具有優勢，是最適合養殖戶和現場操作的診斷方法。ELISA或膠體金試劑卡的診斷方法中，通常需要用到針對沙門氏菌抗原的抗體。所用抗體通常來源于利用菌體或利用提取的沙門氏菌的脂多糖免疫動物所得的多克隆抗體。然而這樣獲得的抗體混合物往往能部分非特異性的與其它非沙門氏菌的部分組成，例如革蘭氏陰性菌脂多糖的組成部分脂質A結合，這樣就導致診斷的重復性及特異性較差，影響了疫病的檢測結果準確性。在抗體的純化中，最常用的方法包括硫酸銨沉淀，ProteinA親和層析純化等。然而這些方法都無法區分不同特異性的抗體。

因此，提供一種針對沙門氏菌特異性抗體純化的介質以及相應的制備方法具有重要意義和廣闊應用前景。

發明內容

針對現有技術的不足及實際的需求，本發明提供一種O抗原親和介質及其制備方法和應用，本發明的O抗原親和基質制備過程簡單，純化操作簡便，效率高，利用該親和介質和純化方法制備出的抗體對O抗原具有高特異性，可用于沙門氏菌的診斷等應用。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：