[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910463571.1
• 申請(qǐng)日: 2019-05-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112014486A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃以超;陳達(dá);劉戈
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 謝肖雄

1.一種檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟I、樣品的保存處理；

步驟II、樣品前處理中的除蛋白以及萃取目標(biāo)化合物；

步驟III、樣品前處理中的衍生化步驟；

步驟IV、樣品上樣之前的pH調(diào)節(jié)；

步驟V、高效液相UPLC的分析與定量；

其中，所述的樣品為保存于抗凝管中的全血樣品，可使用經(jīng)過(guò)EDTA或者肝素抗凝處理的血樣。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述步驟I中樣品的保存處理操作為，經(jīng)過(guò)-80℃深度冷凍24h的50μL的樣品。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述步驟II中樣品的除蛋白及萃取操作為，將經(jīng)過(guò)步驟I處理后的樣品添加10％三氯乙酸并經(jīng)過(guò)立即渦旋以防紅細(xì)胞迅速凝結(jié)成塊而降低萃取效率，然后萃取，待萃取后使用經(jīng)水飽和的甲基叔丁基醚清洗。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述步驟III中樣品的衍生化處理操作為，將經(jīng)過(guò)步驟II處理后的樣品添加1mmol/L鐵氰化鉀的15％氫氧化鈉溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述步驟IV中樣品上樣前的pH調(diào)節(jié)操作為，添加3mol/L的磷酸將經(jīng)過(guò)步驟III處理后樣品的pH調(diào)至8-10，并加入13μL甲醇以增加衍生化產(chǎn)物硫色素在檢測(cè)器下的信號(hào)強(qiáng)度。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述步驟V中高效液相UPLC分析的操作為，使用超高液相體系配備C18色譜柱以及熒光檢測(cè)器FLD。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述10％三氯乙酸用量為100μL，萃取后的樣品使用經(jīng)水飽和的甲基叔丁基醚清洗的體積為2倍，清洗次數(shù)為2次，以去除血液中的脂溶性雜質(zhì)以及過(guò)量的三氯乙酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述1mmol/L鐵氰化鉀的15％氫氧化鈉溶液用量為35μL，室溫下反應(yīng)時(shí)間約5min，與維生素B1標(biāo)志物發(fā)生的氧化成環(huán)反應(yīng)后進(jìn)行渦旋震蕩，生成硫色素，以確保充分的衍生化。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述3mol/L磷酸的用量為30μL。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種簡(jiǎn)單可靠的檢測(cè)少量全血樣品中維生素B1三種標(biāo)志物的方法，其特征在于，所述磷酸可以替換為其它非鹽酸或硫酸的弱酸，使得所述樣品的pH值調(diào)至8-10。