[發明專利]一種新型K血清型副溶血弧菌及其應用

有效

• 申請號: 201910463042.1
• 申請日: 2019-05-30
• 公開（公告）號: CN110129237B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 陳瑜;陳曉;朱巧昀;謝國良;王若南
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07K16/12;C07K16/06;C12R1/63
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供一種新型K血清型副溶血弧菌及其應用。通過與69種已知K血清進行凝集反應和全基因組測序方法，確定新型K血清型副溶血弧菌，保藏編號為CGMCC No.17249。本發明制備的新型K血清，特異性強，可方便快捷地用于檢測一種全新的且近幾年逐漸上升的新型K血清型副溶血弧菌，為感染性腹瀉病原診斷、監測和防控提供重要的檢測技術。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種新型K血清型副溶血弧菌及其應用。

背景技術

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，VP)是食源性疾病的主要病原菌，人類主要通過海 水暴露，生食或半生食海產品而感染，通常引起急性胃腸炎，偶爾也會引起傷口感染和敗血 癥，嚴重者可導致死亡。在我國，食源性疾病暴發監測網數據顯示，副溶血性弧菌引發的食 源性疾病已超過沙門菌和金黃色葡萄球菌，成為食源性疾病暴發中最重要的生物性致病因素。

血清學分型常用于細菌的溯源和遺傳變異研究。副溶血弧菌可根據熱穩定的菌體抗原(O) 和熱不穩定的莢膜抗原(K)進行血清分型。目前，日本副溶血弧菌分型委員會已確認了11 種O和69種K血清型。1996年以前，副溶血弧菌感染并沒有呈現明顯的優勢血清型。直 至1996年2月在印度加爾各答市引起群體暴發性食物中毒事件的新型O3:K6血清型菌株出現。此新發菌株隨后迅速在全球多個沿海國家及地區的人群中發生了廣泛的跨洲際傳播， 并導致了多起大規模暴發事件，成為了副溶血弧菌致病的最主要亞種。然而，自2013年起， 一種與O4血清凝集但與現有69種K血清均不凝集(KUT)的副溶血弧菌明顯增多，在短期內形成跨地區、跨人群感染的優勢傳播，極有可能成為一種重要的流行株。全基因組測序發現該新型菌株的K抗原決定簇與目前NCBI數據庫中副溶血弧菌K抗原決定簇的序列均不同。由此認為，該副溶血弧菌是一種新型K血清型菌株，命名為O4:KUT-recAin。已于2019年2 月20日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱為CGMCC)，保藏編號 為CGMCC No.17249。待相關文章發表后，提交材料至副溶血弧菌血清分型委員會(日本) 進行新血清型命名。本發明涉及一種新型K血清型副溶血弧菌及制備其特異性血清用于腹瀉 相關病原體的檢測。制備的血清能有效地診斷和監測該血清型副溶血弧菌的暴發，對感染性腹瀉病原的防控有著重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型K血清型副溶血弧菌，該新型K血清型副溶血弧菌的保 藏編號為CGMCC No.17249，分類命名為副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus，保藏日期為2019 年2月20日，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區北辰西 路1號院3號，中國科學院微生物研究所)。該副溶血弧菌株的K抗原決定簇的氨基酸序列 SEQ ID No:1所示。

本發明的另一個目的是提供上述副溶血弧菌在制備新型K血清中的應用。

本發明所述的新型K血清，是用上述所述的副溶血弧菌作為抗原，免疫動物制備的，并 經過吸附作用，得到的特異性免疫血清。

優選的，所述的抗原為滅活抗原。

優選的，所述的動物為新西蘭大白兔。

優選的，所述的血清是通過與其他不同K血清型菌株的吸附作用，實現特異性。

本發明所述新型K血清的制備方法，通過以下步驟實現：

(1)抗原準備：將副溶血弧菌接種于3％NaCl的BHI培養基中，37℃過夜培養后，收集菌體，用生理鹽水清洗2次后，用含0.5％甲醛的生理鹽水溶液滅活菌體24h，之后將滅活的菌體溶于生理鹽水中，作為抗原。

(2)收集免疫血清：