[發明專利]一種新型K血清型副溶血弧菌及其應用有效
| 申請號： | 201910463042.1 | 申請日： | 2019-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN110129237B | 公開（公告）日： | 2020-05-26 |
| 發明（設計）人： | 陳瑜;陳曉;朱巧昀;謝國良;王若南 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C07K16/12;C07K16/06;C12R1/63 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 趙杭麗 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 新型 血清 溶血 弧菌 及其 應用 | ||
1.一種新型K血清型副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus），其特征在于，該新型K血清型副溶血弧菌的保藏編號為CGMCC No.17249，該副溶血弧菌株的K抗原決定簇的核苷酸序列如 SEQ ID No:1所示。
2.權利要求1所述的副溶血弧菌在制備新型K血清中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的新型K血清是用權利要求1所述的副溶血弧菌作為抗原，免疫動物制備的，并經過吸附作用，得到的特異性免疫血清。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的抗原為滅活抗原。
5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的動物為新西蘭大白兔。
6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的新型K血清是通過與其他不同K血清型菌株的吸附作用，實現特異性。
7.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述新型K血清的制備方法，通過以下步驟實現：
（1）抗原準備：將權利要求1的副溶血弧菌接種于3%NaCl的BHI培養基中，37℃過夜培養后，收集菌體，用生理鹽水清洗后，用含0.5%甲醛的生理鹽水溶液滅活菌體24h，之后將滅活的菌體溶于生理鹽水中，作為抗原；
（2）收集免疫血清：
挑選健康的新西蘭大白兔，將滅活的副溶血弧菌溶于0.85% NaCl中，濃度為109CFU/ml，免疫4個部位，每個部位250μl，往后間隔2周加強免疫1次，免疫量與首次相同，共免疫5次后，采集全血，在37℃放置2h后，轉移到4℃過夜，之后離心收集血清，該血清即為免疫血清；
（3）特異性免疫血清的制備：
將制備得到的免疫血清與權利要求1所述的副溶血弧菌進行凝集反應，凝集現象明顯，與已知K血清型菌株中的K24、K59、K61血清型菌株有交叉反應，依次用0.5%甲醛滅活的濃度為109CFU/ml的K24菌株、K61菌株、K59菌株4℃吸附免疫血清，之后離心得到的上清，即為本發明的新型K血清。
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