[發(fā)明專(zhuān)利]RFP標(biāo)記小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系及其建立和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910461937.1
• 申請(qǐng)日: 2019-05-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110157684A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧紅陽(yáng);姜志明;劉小珍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江省腫瘤醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/10;C12N15/867;C12Q1/02
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 周麗娟

本發(fā)明公開(kāi)了一種RFP標(biāo)記小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系及其建立和應(yīng)用。以小細(xì)胞肺癌LTEP?P細(xì)胞株為母細(xì)胞，轉(zhuǎn)染包裝有表達(dá)RFP的pLEIN逆轉(zhuǎn)錄病毒，再經(jīng)G418抗性篩選，獲得穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)RFP的小細(xì)胞肺癌LTEP?P細(xì)胞系。該RFP標(biāo)記小細(xì)胞肺癌LTEP?P細(xì)胞系腫瘤特性穩(wěn)定，具有特異性胸腔內(nèi)高轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，能夠穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)RFP使得其易于被觀察，便于在肺癌轉(zhuǎn)移的各階段進(jìn)行實(shí)時(shí)顯示、跟蹤、計(jì)算和測(cè)量等研究工作。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞系領(lǐng)域，具體涉及小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系及其建立和應(yīng)用。

背景技術(shù)

肺癌是發(fā)病率最高的惡性腫瘤，是癌癥防治的重點(diǎn)。肺癌按組織病理學(xué)可以分為小細(xì)胞肺癌(Small-cell lung cancer，SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non-small celllungcancer,NSCLC)。小細(xì)胞肺癌的癌細(xì)胞多為類(lèi)圓形或菱形，胞漿少，類(lèi)似淋巴細(xì)胞，可能是起源于神經(jīng)外胚層的Kulchitsky細(xì)胞或者嗜銀細(xì)胞。胞漿中含有神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒，具有內(nèi)分泌和化學(xué)受體功能，能分泌多種肽類(lèi)物質(zhì)，可引起類(lèi)癌綜合癥。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示：小細(xì)胞肺癌約占所有肺癌總數(shù)的15％左右；未經(jīng)治療的小細(xì)胞肺癌患者的中位生存期僅為2到3個(gè)月。小細(xì)胞肺癌的發(fā)病與煙草吸食密切相關(guān)。因此，在東歐和亞洲等煙草消費(fèi)量大的地區(qū)，小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率長(zhǎng)期保持在較高水平。

在臨床上，小細(xì)胞肺癌雖然對(duì)化療較敏感，但相比較其他類(lèi)型肺癌而言，小細(xì)胞肺癌在臨床上表現(xiàn)為腫瘤侵染性強(qiáng)，具有快速生長(zhǎng)、早期轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，其發(fā)生轉(zhuǎn)移的時(shí)間早，轉(zhuǎn)移率高，病程進(jìn)展快，預(yù)后差，長(zhǎng)期生存率很低。小細(xì)胞肺癌幾乎可以向全身各個(gè)臟器進(jìn)行轉(zhuǎn)移，尤其以中樞神經(jīng)系統(tǒng)、骨骼、肝臟等最為好發(fā)。90％以上的小細(xì)胞肺癌患者在就診時(shí)就已經(jīng)發(fā)生胸腔內(nèi)轉(zhuǎn)移(縱隔淋巴結(jié)或肺內(nèi)轉(zhuǎn)移)，2/3以上的患者甚至出現(xiàn)腦、骨、肝等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，腫瘤轉(zhuǎn)移成為小細(xì)胞肺癌治療所面臨的棘手問(wèn)題。

腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的基本生物學(xué)特征之一，高達(dá)95％以上的小細(xì)胞肺癌患者最終將因腫瘤轉(zhuǎn)移或疾病復(fù)發(fā)而死亡。因此，探索小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的機(jī)制，尋求有效抑制小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的藥物具有重要意義。目前，人們對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程，特別是早期過(guò)程的認(rèn)識(shí)和了解仍十分欠缺，只從腫瘤患者臨床觀察中積累資料或?qū)ふ揖€索是相當(dāng)有限的。要想了解腫瘤轉(zhuǎn)移早期階段所發(fā)生的各種改變及其分子機(jī)理，從而有效地進(jìn)行干預(yù)非常困難。而任何新的腫瘤防治方法和措施(包括新的抗癌藥物、手術(shù)方法、射線劑量及投照部位和方法等)未經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)便在腫瘤患者身上試用是不道德的甚至是違法的。因此，腫瘤細(xì)胞模型和動(dòng)物模型在腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)理的基礎(chǔ)研究及抗癌新方法的療效觀察和評(píng)估中是絕對(duì)不可缺少的。就小細(xì)胞肺癌而言，建立高轉(zhuǎn)移小細(xì)胞肺癌細(xì)胞模型和動(dòng)物模型是研究小細(xì)胞肺癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移規(guī)律、評(píng)價(jià)抗小細(xì)胞肺癌藥物療效的基礎(chǔ)。

目前，對(duì)于小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移研究主要集中在骨轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn)移等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，研究小細(xì)胞肺癌的特異性胸腔轉(zhuǎn)移對(duì)于小細(xì)胞肺癌的早期診斷可能具有特別重要的潛在意義，而且對(duì)于小細(xì)胞肺癌的特異性轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究也有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種紅色熒光蛋白(Red Fluorescent Protein,RFP)標(biāo)記小細(xì)胞肺癌LTEP-P細(xì)胞系及其建立和應(yīng)用。該RFP標(biāo)記小細(xì)胞肺癌LTEP-P細(xì)胞系腫瘤特性穩(wěn)定，具有特異性胸腔內(nèi)高轉(zhuǎn)移性的特點(diǎn)，能夠穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)紅色熒光蛋白使得其易于被觀察，便于在肺癌轉(zhuǎn)移的各階段進(jìn)行實(shí)時(shí)顯示、跟蹤、計(jì)算和測(cè)量等研究工作。

為此，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案：

一種RFP標(biāo)記小細(xì)胞肺癌LTEP-P細(xì)胞系，是以小細(xì)胞肺癌LTEP-P細(xì)胞株為母細(xì)胞，轉(zhuǎn)染包裝有RFP的pLEIN逆轉(zhuǎn)錄病毒，再經(jīng)G418抗性篩選，獲得穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)紅色熒光蛋白(RFP)的小細(xì)胞肺癌LTEP-P細(xì)胞系。

所述RFP標(biāo)記小細(xì)胞肺癌LTEP-P細(xì)胞系，又記為L(zhǎng)TEP-P-RFP腫瘤細(xì)胞，呈近于圓形，透亮，具有強(qiáng)的體外成瘤能力和特異胸腔內(nèi)高轉(zhuǎn)移性。