[發(fā)明專利]一株銅綠假單胞菌及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910461130.8
• 申請日: 2019-05-30
• 公開（公告）號: CN110129213B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓雪容;李慶輝;楊家鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 長春理工大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/62;G01N30/06;C12R1/385
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23210
• 代理人: 解瑩明

1.一株銅綠假單胞菌，其為銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO：M 2018927。

2.如權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應(yīng)用，其特征在于銅綠假單胞菌合成聚羥基脂肪酸酯的方法為：

(一)、將上述的銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1活化得到菌液，然后將菌液按照5％的體積比接種到含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1％～4％碳源的MS培養(yǎng)基中，在35～38℃、160～200rpm條件下振蕩培養(yǎng)70～75h，得到發(fā)酵液；其中碳源為豆油或廢棄食用油；

(二)、步驟一中的發(fā)酵液在5000rpm/min條件下離心20min，棄上清液留沉淀，將沉淀進(jìn)行干燥；

(三)、按照重量百分比為1～3％的比例向步驟三中的干燥物中加入氯仿，超聲波破碎8～12min后，于28～32℃搖床上震蕩提取45～50h，抽濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除氯仿；

(四)、向步驟三中的剩余物中加入甲醇溶液，搖勻混合液靜置析出白色絮狀固體，過濾、凍干后即得到聚羥基脂肪酸酯；其中甲醇與剩余物的重量比為4～6:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應(yīng)用，其特征在于步驟一中活化的方法為：將銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1接種到5mL LB液體培養(yǎng)基中，在35～38℃、160～200rpm條件下振蕩培養(yǎng)12～16h，即完成了活化。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應(yīng)用，其特征在于步驟一中在37℃、180rpm條件下振蕩培養(yǎng)72h。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應(yīng)用，其特征在于步驟三中于30℃搖床上震蕩提取48h。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應(yīng)用，其特征在于步驟四中甲醇與剩余物的重量比為5:1。

8.用權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌合成的聚羥基脂肪酸酯制備GC-MS樣品的方法，其特征在于制備GC-MS樣品的方法按照以下步驟進(jìn)行：

(一)、50mg權(quán)利要求2所合成的聚羥基脂肪酸酯和2mL到濃度為15％硫酸甲醇溶液中混合均勻，再加入2mL氯仿溶液混合，在100℃條件下加熱3h，然后冷卻至室溫，即得到第一次混合液；

(二)、第一次混合液與1mL去離子水混合，振蕩混勻后靜置分層，然后取下層氯仿相，過濾后與無水硫酸鎂混合充分除水后靜置得到第二次混合液；

(三)、向第二次混合液中加入500μL的0.1％氯仿標(biāo)準(zhǔn)品溶液混合均勻，即得到GC-MS樣品；其中標(biāo)準(zhǔn)品為正辛酸乙酯。