[發(fā)明專利]一株銅綠假單胞菌及其應用

有效

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• 申請日: 2019-05-30
• 公開（公告）號: CN110129213B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設計）人: 韓雪容;李慶輝;楊家鑫
• 申請（專利權）人: 長春理工大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/62;G01N30/06;C12R1/385
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 解瑩明

一株銅綠假單胞菌及其應用，本發(fā)明涉及一種假單胞菌及其應用。本發(fā)明解決了現(xiàn)有PHA生產菌株的生產能力差、生產成本高的問題。本發(fā)明的銅綠假單胞菌，其為銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93?3?1，本發(fā)明銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應用；本發(fā)明銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93?3?1以豆油或者廢棄食用油為碳源，制備得到聚羥基脂肪酸酯，其含有3?羥基辛酸、3?羥基癸酸和3?羥基十二烷酸中長鏈脂肪酸三種單體結構，本發(fā)明的菌Pseudomonas aeruginosa 93?3?1具有優(yōu)異的生產能力，生產成本低。

技術領域

本發(fā)明涉及一種假單胞菌及其應用。

背景技術

聚羥基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoates,PHA)是許多種微生物在碳、氮營養(yǎng)失衡的情況下，作為碳源和能源貯存物質而在體內合成的一類直鏈脂肪族熱塑性聚酯。PHA的結構由含有羥基的多樣的脂肪酸單體組成，根據(jù)脂肪酸側鏈的長短和結構，PHA可以分為3種：含有3-5個碳原子的短鏈short-chain-length PHA(scl-PHA)；含有6-14個碳原子的中鏈medium-chain-length PHA(mcl-PHA)和含有多于14個碳原子的長鏈long-chain-lengthPHA(lcl-PHA)。基于單體的多樣性，PHA具有從脆性到彈性的廣泛材料性質。

PHA具有類似于石油基塑料的良好的熱塑性，還兼具生物可降解性、氣體相隔性，作為不能自然分解的塑料的替代品已被廣泛研究。除此之外，PHA還具有生物相容性、光學活性、壓電性等諸多優(yōu)秀性能，在生物醫(yī)用材料和制藥領域擁有潛在的應用前景。目前因為PHA生產菌株的生產能力、獲得的PHA的材料性質以及生產成本的限制，導致PHA在高附加值領域的應用開發(fā)相對滯后。因此，具有高生產能力和可控材料性質菌株的篩選、利用廉價碳源的發(fā)酵降低合成成本等研究勢在必行。

發(fā)明內容

本發(fā)明為了解決現(xiàn)有PHA生產菌株的生產能力差、生產成本高的問題，而提供了一株銅綠假單胞菌及其應用。

本發(fā)明菌株為銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO：M 2018927。Pseudomonas aeruginosa 93-3-1的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基是含有1％～4％碳源的MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為37℃、pH值為7；其中碳源為豆油或廢棄食用油。

本發(fā)明的銅綠假單胞菌在合成聚羥基脂肪酸酯上的應用。利用該菌合成聚羥基脂肪酸酯的具體方法按照以下步驟進行：

一、將上述的Pseudomonas aeruginosa 93-3-1活化得到菌液，然后將菌液按照5％的體積比接種到含有質量百分數(shù)為1％～4％碳源的MS培養(yǎng)基中，在35～38℃、160～200rpm條件下振蕩培養(yǎng)70～75h，得到發(fā)酵液；其中碳源為豆油或廢棄食用油；

二、步驟一中的發(fā)酵液在5000rpm/min條件下離心20min，棄上清液留沉淀，將沉淀進行干燥；

三、按照重量百分比為1～3％的比例向步驟三中的干燥物中加入氯仿，超聲波破碎8～12min后，于28～32℃搖床上震蕩提取45～50h，抽濾、旋轉蒸發(fā)去除氯仿；

四、向步驟三中的剩余物中加入甲醇溶液進行沉淀，搖勻混合液靜置析出白色絮狀固體，凍干后即得到聚羥基脂肪酸酯；其中甲醇與剩余物的重量比為4～6:1。

用上述的銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1得到的聚羥基脂肪酸酯制備GC-MS樣品的方法按照以下步驟進行：

一、50mg上述合成的聚羥基脂肪酸酯和2mL到濃度為15％(v/v)硫酸甲醇溶液中混合均勻，再加入2mL氯仿溶液混合，在100℃條件下加熱3h，然后冷卻至室溫，即得到第一次混合液；