[發明專利]皂苷元內酯的制備方法

有效

• 申請號: 201910451715.1
• 申請日: 2019-05-28
• 公開（公告）號: CN110157763B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 車彥云;張雅瓊;饒高雄;趙毅;白春艷;吳三同
• 申請（專利權）人: 云南中醫藥大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C07J71/00
• 代理公司: 北京悅成知識產權代理事務所(普通合伙) 11527
• 代理人: 高艷麗

本發明公開了一種皂苷元內酯的制備方法，包括如下步驟：(1)將苦丁茶冬青皂苷D溶于有機溶劑中形成樣品溶液；(2)制備腸道菌孵育液；(3)將樣品溶液與腸道菌孵育液混合均勻后得混合液，將混合液置于厭氧環境中恒溫振蕩培育20～150h，培育后的混合液加入萃取溶劑進行萃取，萃取后取上清液，然后除去萃取溶劑得到殘渣，將殘渣溶于甲醇中得到醇溶液；(4)將醇溶液通過反相液相色譜柱分離，收集皂苷元α?苦丁內酯流出時間段內的流出液，將收集的流出液濃縮得皂苷元α?苦丁內酯。本發明能夠從苦丁茶冬青皂苷D中制備皂苷元α?苦丁內酯。

技術領域

本發明涉及一種苦丁皂苷元內酯的制備方法。

背景技術

苦丁茶冬青為冬青科植物苦丁茶冬青的葉，有清熱解暑功效，用于暑月外感風寒，內傷生冷而致惡寒發熱，頭痛脘痞，嘔惡泄瀉等癥。近年來，有人對苦丁茶冬青葉的化學成分和藥理作用進行了深入研究。研究表明，苦丁茶冬青中的主要成分有酚類、五環三萜皂苷和三萜等，五環三萜內酯為苦丁茶皂苷元。實驗證明，苦丁茶冬青中皂苷具有改善心血管系統、降血脂、降血壓、降血糖和提高免疫力方面的功能，其在體內發揮活性的形式可能是苦丁茶皂苷元α-苦丁內酯、β-苦丁內酯和γ-苦丁內酯。

CN101775061A公開了一組苦丁茶皂苷類化合物，其中公開了苦丁酮A，B，D，E，F和G，上述苦丁酮均通過苦丁茶有機溶劑萃取分離獲得。CN104402965A公開了一種從苦丁茶冬青中分離苦丁苷A和苦丁苷D的方法，該方法通過有機溶劑萃取和液相色譜分離的方法分別獲得苦丁苷A和苦丁苷D，但是苦丁苷A和苦丁苷D均為五環三萜皂苷。CN102600214A公開了一種苦丁茶冬青葉的提取方法、總皂苷及用途，所述提取方法制備的是苦丁茶總皂苷及其單體化合物。

發明內容

有鑒于此，本發明的一個目的在于提供一種皂苷元內酯的制備方法，從苦丁茶冬青中提取了苦丁茶皂苷在體內的真正活性成分皂苷元α-苦丁內酯。

本發明采用如下技術方案實現上述目的。

本發明提供一種皂苷元內酯的制備方法，所述的皂苷元內酯為皂苷元α-苦丁內酯，包括如下步驟：

(1)將苦丁茶冬青皂苷D溶于有機溶劑中形成樣品溶液；

(2)制備腸道菌孵育液；

(3)將樣品溶液與腸道菌孵育液混合均勻后得混合液，將混合液置于厭氧環境中恒溫振蕩培育20～150h，培育后的混合液加入萃取溶劑進行萃取，萃取后取上清液，然后除去萃取溶劑得到殘渣，將殘渣溶于甲醇中，得到醇溶液；

(4)將醇溶液通過反相液相色譜柱分離，收集皂苷元α-苦丁內酯流出時間段內的流出液，將收集的流出液濃縮得皂苷元α-苦丁內酯。

根據本發明的制備方法，優選地，步驟(1)中，將苦丁茶冬青皂苷D溶于二甲基亞砜中，再加入無菌水得到樣品溶液；其中，樣品溶液中的苦丁茶冬青皂苷D的濃度為1～6mg/mL。

根據本發明的制備方法，優選地，步驟(2)中，制備腸道菌孵育液包括以下步驟：

(a)制備滅菌厭氧培養基；

(b)取糞便與生理鹽水混合均勻制成混懸液，所述混懸液中糞便與生理鹽水的配比為1mg:2～6mL；

(c)取混懸液沉淀后的上清液，加入滅菌厭氧培養基混勻，然后將混合液恒溫振蕩厭氧培養15～35h，得到腸道菌孵育液；其中，上清液與滅菌厭氧培養基的體積比為1:6～12。

根據本發明的制備方法，優選地，還包括如下步驟：

(d)將步驟(c)制備的腸道菌孵育液經過分離和鑒定，分離出腸球菌孵育液或擬桿菌孵育液作為步驟(2)中的腸道菌孵育液。