[發(fā)明專利]一種毛孢子菌的檢測(cè)試劑盒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910438041.1
• 申請(qǐng)日: 2019-05-22
• 公開（公告）號(hào): CN110133263A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴演媚;劉靈輝;賴柔貝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州愛康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/531;G01N21/78
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;宋靜娜

本發(fā)明公開了一種毛孢子菌檢測(cè)試劑盒及其制備方法，毛孢子菌檢測(cè)試劑盒包含毛孢子菌捕獲抗體包被的酶標(biāo)板、毛孢子菌檢測(cè)抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀釋緩沖液、包被緩沖液、封閉緩沖液、底物溶液及終止液。本發(fā)明利用多克隆毛孢子菌捕獲抗體包被酶標(biāo)板，使用高度特異性ELISA結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)真菌培養(yǎng)方法證明了毛孢子菌特異性多抗(pAb)在混合培養(yǎng)物中區(qū)分T.asahii與其他酵母病原體的準(zhǔn)確性，以及本發(fā)明中捕獲抗體與可與毛孢子菌特異性結(jié)合。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床醫(yī)學(xué)免疫檢測(cè)試技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種毛孢子菌的檢測(cè)試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

原發(fā)毛孢子菌病是一種罕見病死率較高的侵襲性真菌病，早期診斷并及時(shí)治療是搶救成功的關(guān)鍵。毛孢子菌病是一種致死性的機(jī)會(huì)性感染，多繼發(fā)于免疫功能低下以及有糖尿病、惡性血液系統(tǒng)疾病等危險(xiǎn)因素的患者，在免疫功能低下的患者中引起播散性疾病，尤其是那些因患有血液病或化療而出現(xiàn)中性粒細(xì)胞減少的患者。在惡性血液病患者中，毛孢子菌屬已成為除念珠菌屬外致人類播散性感染第二位的酵母菌。吸入毛孢子菌孢子也是日本夏季型過(guò)敏性肺炎的最重要原因。此病臨床表現(xiàn)多為發(fā)熱、咳嗽，咯血，胸部平片及CT上可表現(xiàn)為滲出，楔形的實(shí)變，單側(cè)或雙側(cè)結(jié)節(jié)樣病變，孤立或多發(fā)腫塊，空洞。

由于缺乏對(duì)毛孢子菌病的認(rèn)識(shí)和對(duì)此病原體的診斷，毛孢子蟲病常被誤診為念珠菌病或隱球菌病。據(jù)ARTEMIS DISK全球抗真菌監(jiān)測(cè)研究報(bào)導(dǎo)，毛孢子菌是第三位常用的非念珠菌酵母。中國(guó)真菌監(jiān)測(cè)網(wǎng)報(bào)導(dǎo)，目前毛孢子菌已經(jīng)是第三位侵襲性真菌，僅次于念珠菌和隱球菌。血液惡性腫瘤患者的高死亡率與毛孢子菌病有關(guān)，文獻(xiàn)報(bào)道高風(fēng)險(xiǎn)患者組有50％至80％的致死率。

入侵性毛孢子菌病的早期診斷對(duì)于迅速有效的治療至關(guān)重要，但目前沒有早期診斷的方法。毛孢子菌感染只有通過(guò)真菌病原學(xué)和組織病理學(xué)才能明確診斷。近年開展的真菌抗原檢測(cè)如G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)等在毛孢子菌感染時(shí)均為陰性；痰液、針吸液及支氣管肺泡灌洗液培養(yǎng)陽(yáng)性率小于5％，血培養(yǎng)的陽(yáng)性率更低；確診主要依靠組織病理學(xué)。以前因肺毛孢子菌病進(jìn)展快、病死率高，確診主要依靠尸體解剖。目前診斷肺毛孢子菌病最主要的方法是纖維支氣管鏡活檢，但僅有約40％病例可見氣管內(nèi)病變。影像學(xué)表現(xiàn)無(wú)特異性。基于核酸的方法診斷方法并沒有被標(biāo)準(zhǔn)化而應(yīng)用于臨床。某些免疫檢測(cè)有交叉反應(yīng)，例如，可與隱球菌抗原檢測(cè)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。因而，也可導(dǎo)致錯(cuò)誤鑒定和不當(dāng)使用抗真菌藥物。

發(fā)明內(nèi)容

基于上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種毛孢子菌的檢測(cè)試劑盒，其能快速靈敏地檢測(cè)血清中毛孢子菌的存在，明確患者是否被毛孢子菌感染。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種毛孢子菌檢測(cè)試劑盒，包含毛孢子菌捕獲抗體包被的酶標(biāo)板、毛孢子菌檢測(cè)抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀釋緩沖液、包被緩沖液、封閉緩沖液、底物溶液及終止液。其中，標(biāo)準(zhǔn)品包括標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清(陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣本)、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清(陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣本)。

優(yōu)選地，所述毛孢子菌捕獲抗體為抗TA-Ag小鼠多克隆抗體。

優(yōu)選地，所述毛孢子菌檢測(cè)抗體為抗TA-Ag兔多克隆抗體。更優(yōu)選地，抗TA-Ag兔多克隆抗體采用HRP標(biāo)記。

優(yōu)選地，所述抗TA-Ag兔多克隆抗體的效價(jià)比大于或等于1：5000。

優(yōu)選地，所述樣本稀釋緩沖液為Tris-Cl緩沖液、磷酸緩沖液或檸檬酸緩沖液的一種或多種的組合，所述樣本稀釋緩沖液的濃度為10～100mM，含有1.0～5.0％的封閉劑、0.01～0.05％非離子型去污型、0.1～5.0％的蛋白穩(wěn)定劑、50～200mM NaCl、0.01～0.05％防腐劑，pH值為7.0～8.0。更優(yōu)選地，封閉試劑選自BSA、脫脂奶粉或酪蛋白，濃度為0.5～5％；非離子型去污劑選自Triton X-100或Tween-20；蛋白穩(wěn)定劑選自PVP、蔗糖或明膠。