[發明專利]一種用于轉染T細胞的培養基及其應用

在審

• 申請號: 201910432914.8
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN111979190A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 賴岳陽;徐學博
• 申請（專利權）人: 南京依莫諾飛生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N15/87
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 胡建華

本發明公開了一種用于轉染T細胞的培養基，包括如下組分：二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇、二價鈣鹽，所述的二價鈣鹽為CaCl₂，二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇的摩爾比為4:3:3。本發明對急性T淋巴細胞白血病細胞系和小鼠原代T細胞的轉染效率高達65％，遠高于其他商業化的脂質體轉染試劑。

技術領域

本發明屬于免疫細胞轉染技術領域，具體涉及一種用于轉染T細胞的培養基及其應用。

背景技術

免疫細胞由于其特殊的功能和性質難以被常規的脂質體材料遞送的DNA或RNA 所影響。無論是質粒過表達、CRISPR敲除或是siRNA沉默，脂質體轉染法都無法有效地在免疫細胞中發揮作用，其轉染效率往往低于20％。現有技術中較為常用的脂質體轉染產品，如Lipofectamine3000、Polyjet,FugeneHD等，無一例外無法對免疫細胞，如巨噬細胞、T細胞、DC細胞等進行有效的轉染。

現有技術中較為有效的免疫細胞轉染手段主要是病毒轉染法和電穿孔轉染法兩種。病毒轉染主要采用慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等進行核酸的遞送。病毒轉染法對免疫細胞有著較高的轉染效率。根據免疫細胞種類的不同，病毒轉染法對免疫細胞的轉染效率可以達到70％～95％。目前較為先進的CAR-T療法，就是通過慢病毒轉染法在體外對從病人體中分離出的T細胞進行基因改造。然而，病毒的制備步驟繁多，程序復雜，還伴隨著難以克服的安全隱患(病毒在制備過程中可感染實驗人員)。電穿孔轉染法需要用到電穿孔儀，操作簡便。但電穿孔法顧名思義需要在細胞表面打孔，這使得使用電穿孔法后細胞的存活率大大降低，而其轉染效率也低于病毒轉染法。

發明內容

發明目的：本發明要解決的技術問題是提供一種對免疫細胞具有高轉染效率的脂質體培養基配方。

本發明還要解決的技術問題是提供上述對免疫細胞具有高轉染效率的脂質體培養基配方的應用。

為解決上述技術問題本發明采用如下技術方案：

一種用于轉染T細胞的培養基，包括如下組分：二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇、二價鈣鹽。

二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉有免疫抑制的作用(immnuo-suppressive)，可在進行轉染時抑制免疫細胞活性，避免轉染復合物過早地被免疫細胞所降解而無法發揮作用。

二油酰基卵磷脂(DOPC，1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)其結構如下：

二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉(DOPS，1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine sodium salt)其結構如下：

膽固醇(Cholesterol)，其結構如下：

其中，所述的二價鈣鹽為CaCl₂。

其中，所述的二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇的摩爾比為4:3:3。

其中，所述二價鈣鹽的含量為2mM。

其中，所述所述二油酰基卵磷脂的濃度為4.8nM、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉的濃度為3.6mM、膽固醇的濃度為3.6nM。

其中，該配方中包括核酸。

其中，所述核酸為RNA或DNA；

當所述核酸為RNA時，RNA含量為為20～160nM，優選40nM；

當所述核酸為DNA時，DNA含量為40～320nM，優選80nM。