[發明專利]一種用于轉染T細胞的培養基及其應用在審
| 申請號： | 201910432914.8 | 申請日： | 2019-05-23 |
| 公開（公告）號： | CN111979190A | 公開（公告）日： | 2020-11-24 |
| 發明（設計）人： | 賴岳陽;徐學博 | 申請（專利權）人： | 南京依莫諾飛生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;C12N15/87 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 胡建華 |
| 地址： | 210043 江蘇省南京市江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 轉染 細胞 培養基 及其 應用 | ||
1.一種用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，包括如下組分：二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇、二價鈣鹽。
2.根據權利要求1所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，所述的二價鈣鹽為CaCl2。
3.根據權利要求1所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，所述的二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇的摩爾比為4:3:3。
4.根據權利要求1或2所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，所述二價鈣鹽的含量為2mM。
5.根據權利要求1或2所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，所述二油酰基卵磷脂的濃度為4.8nM、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉的濃度為3.6nM、膽固醇的濃度為3.6nM。
6.根據權利要求1所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，該培養基中包括核酸。
7.根據權利要求6所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，所述核酸為RNA或DNA；
當所述核酸為RNA時，RNA含量為20～160nM；
當所述核酸為DNA時，DNA含量為40～320nM。
8.根據權利要求1所述的用于轉染T細胞的培養基，其特征在于，該培養中包括細胞培養基，所述細胞培養基為DMEM培養基或RPMI-1640培養基。
9.一種脂質體介導的細胞轉染方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)配置包含二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇的脂質體轉染母液，其中二油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉、膽固醇的摩爾比為4:3:3；
(2)向細胞培養基中加入脂質體轉染母液、CaCl2溶液及待轉染核酸得到轉染培養基；
所述轉染培養基中二油酰基卵磷脂的濃度為4.8nM、二油酰基磷脂酰絲氨酸鈉的濃度為3.6mM、膽固醇的濃度為3.6nM；
所述細胞培養基為DMEM培養基或RPMI-1640培養基；
所述轉染培養基中CaCl2溶液的濃度為2mM；
所述待轉染核酸為RNA或DNA，所述RNA的終濃度為20～160nM，所述DNA的終濃度為40～320nM；
(3)去除待轉染細胞的完全培養基，加入轉染培養基，培養24h，所述待轉染細胞為T細胞或原代T細胞；
(4)去除轉染培養基，加入完全培養基，繼續培養24h，得到轉染成功的細胞。
10.權利要求1～8任一所述用于轉染T細胞的培養基在急性T淋巴細胞白血病細胞、原代T細胞、A549細胞、H1299細胞、HeLa細胞、SW480細胞轉染中的應用。
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