[發明專利]檢測獼猴血漿中中期因子反義寡核苷酸含量的方法

有效

• 申請號: 201910432682.6
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN110346493B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 車津晶;原梅;朱小雨;張小差;劉作鋒
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張敏

1.一種檢測獼猴血漿中中期因子反義寡核苷酸含量的方法，其特征在于，包括：

(1)取含有中期因子反義寡核苷酸的待測獼猴血漿，向所述獼猴血漿中加入流感泰德作為內標液，再加入適量氨水溶液、苯酚/二氯甲烷混合液，然后依次進行渦流后離心，以便得到處理后血樣；

(2)取所述血樣的上清液并進行LC/MS/MS分析；

其中，所述LC/MS/MS分析采用的色譜條件如下：

色譜柱：WatersMS C18色譜柱，2.1mm×50mm；

流動相A：六氟異丙醇HFIP和三乙胺TEA的混合水溶液；

流動相B：六氟異丙醇HFIP與三乙胺TEA的混合甲醇水溶液；

流速：200μL/min；

洗脫程序：

0min 5％B相，3min 100％B相，7min 100％B相，7.5min 5％B相，12min 5％B相；

所述LC/MS/MS分析采用的質譜條件如下：

以高純氮氣作為碰撞氣、氣簾氣、ESI源負離子掃描，MRM掃描方式；

質譜條件為：碰撞氣：12；氣簾氣：10；離子源1：40；離子源2：70；離子電離電壓：-4500；溫度：200；

檢測物參數

中期反義因子MRM：695.8→304.2,內標MRM：675.8→319.0，兩者DP：-85；EP：-11；CE：-45；CXP：-18；

(3)繪制標準曲線，并根據標準曲線法對所述待測獼猴血漿中所述中期因子反義寡核苷酸的含量進行定量分析；

所述流動相A為200mM HFIP和2.85mM TEA的混合水溶液；

所述流動相B為200mM HFIP和2.85mM TEA的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇與水的體積比為60∶40。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流感泰德的濃度為100μg/mL，所述流感泰德的加入量為所述待測獼猴血漿的25體積％。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨水的濃度為5％，所述氨水的加入量為所述待測獼猴血漿的2.5體積。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述苯酚/二氯甲烷混合液中苯酚與二氯甲烷的體積比為1∶1，所述苯酚/二氯甲烷混合液的加入量與所述待測獼猴血漿體積比為1∶1。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述渦流時間為10min；所述離心是在15000rpm/min的條件下進行5min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準曲線的線性范圍為0.18-200μg/mL。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的最低檢測限為0.18μg/mL。

8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于，所述待測獼猴血漿中的所述中期因子反義寡核苷酸是通過對獼猴注射中期因子反義寡核苷酸納米制劑獲得的。