[發(fā)明專利]一種牡丹蛋白肽的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910432550.3
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN110205352A
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王世英;趙欣;謝瑞生
• 申請（專利權(quán)）人: 世堃堂（廣東）生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 張學(xué)府

本發(fā)明涉及牡丹蛋白肽制備方法，具體步驟如下，從帶種皮或者不帶種皮的牡丹籽粕中提取出牡丹蛋白，利用超臨界CO₂萃取技術(shù)去除辛辣味，選擇適宜的復(fù)合酶，通過適宜的組合，控制酶解反應(yīng)條件，破壞不同位點(diǎn)的肽鍵，可以直接獲得不同特定分子量的蛋白肽，特定分子量包括小于1000Da，1000Da?2000Da，2000Da?3000Da，特定分子量的蛋白肽得率都在95％以上，本發(fā)明制備牡丹蛋白肽的方法無需超濾分級，節(jié)省反應(yīng)步驟，提高制備效率，降低生產(chǎn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及牡丹籽粕蛋白肽技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種牡丹蛋白肽的制備方法。

背景技術(shù)

牡丹是毛莨科芍藥屬灌木，廣泛分布于河南洛陽、山東菏澤、安徽銅陵、陜西漢中、河北柏山等地，以洛陽、菏澤、銅陵種植最多，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國牡丹的種植面積已達(dá)30萬畝，由于牡丹籽的含油量高，且富含亞油酸和亞麻酸，因此近幾年，牡丹籽被大量應(yīng)用于榨油，而榨油后的固體殘?jiān)档ぷ哑?，大多被直接廢棄或者當(dāng)做肥料，利用情況不理想，經(jīng)過測定發(fā)現(xiàn)，牡丹籽粕中粗蛋白含量約為20％，因此，利用提取過牡丹籽油的牡丹籽粕來提取牡丹籽蛋白成為可能。

蛋白質(zhì)是食品的重要組成成分，蛋白質(zhì)經(jīng)酶解后得到蛋白肽，其功能特性和生物學(xué)特性，與原有蛋白質(zhì)有較大差別，如酶解后可改善蛋白質(zhì)的溶解性，乳化性，起泡性等功能特性，我國每年都有大量煉油后的牡丹籽粕產(chǎn)物，可以得到大量的牡丹蛋白，因此，如何高效率、低成本得到滿足生活所需的牡丹蛋白肽，是現(xiàn)在的研究熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述問題，研究出可得到特定分子量牡丹蛋白肽的方法，該方法制備安全，工藝簡便，不用利用超濾分級，提高了制備效率，降低了生產(chǎn)成本。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種牡丹蛋白肽的制備方法，所述方法步驟為：

S1：將牡丹籽粕粉碎，用超臨界CO₂萃取脫脂，過篩，按料液比1:20～30與水混合，加入NaOH調(diào)節(jié)pH9～10，50～60℃條件下磁力攪拌60～70min，離心(3500～4000r/min， 13～18min)，取上清液，加入HCl，調(diào)節(jié)pH3～4，離心(3500～4000r/min，13～18min)，沉淀用少量去離子水清洗至中性后冷凍干燥，得牡丹籽蛋白；

S2：將S1所得牡丹籽蛋白溶解，溶解液用超臨界CO₂萃取，萃取壓力10-14MPa，萃取100～120min，萃取完后常溫靜置半小時，收集蛋白液，可以脫出牡丹蛋白中辛辣味；

S3：取步驟S2所得蛋白液3份，加入復(fù)合蛋白酶進(jìn)行酶解，所述復(fù)合蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶1～2份，果膠酶3～5份，酶活力為110～120u/mL，酶解反應(yīng)pH6.5～7.0，反應(yīng)溫度40～60℃，反應(yīng)時間2～4h，酶解后，高溫滅活，加入8％～12％的HCl，調(diào)節(jié)pH至4.0～4.5，在90～100r/min 條件下攪拌，使未酶解的牡丹蛋白呈凝乳狀析出，過濾分離，提純后噴霧干燥得牡丹蛋白肽， SDS-PAGE電泳測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量為小于1000Da，凱氏定氮法測定得到小于1000Da 蛋白肽的得率在95％以上。

優(yōu)選的，所述步驟S3中的復(fù)合蛋白酶為β-半乳糖苷酶和a-葡萄糖苷酶，加入β-半乳糖苷酶1～2份，a-葡萄糖苷酶4～5份，酶活力為80～90u/mL，酶解反應(yīng)pH為6.0～7.0，反應(yīng)溫度 40～45℃，反應(yīng)時間3～4h，酶解后，高溫滅活，加入8％～12％的HCl，調(diào)節(jié)pH至4.0～4.5，在70～80r/min條件下攪拌，使未酶解的牡丹蛋白呈凝乳狀析出，過濾分離，提純后噴霧干燥得牡丹蛋白肽，SDS-PAGE電泳測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量為1000～2000Da，凱氏定氮法測定得到1000～2000Da蛋白肽的得率在95％以上。