[發明專利]一種氮雜環丙烯在抗體偶聯藥物連接體的應用修飾的方法

有效

• 申請號: 201910432284.4
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN110141665B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 姜耀甲;陳陽;羅德平
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 邢文月

本發明公開了一種氮雜環丙烯在抗體偶聯藥物連接體的應用修飾的方法，該方法包括以下步驟：往pH值為7.0～7.6的Tris?HCl緩沖溶液中加入氮雜環丙烯化合物，在室溫、氮氣氛圍環境下加入多肽鏈進行反應，反應結束后將溶劑旋干，經過制備液相色譜分離得到二聚的硫代縮醛。本發明方法可在水相中直接反應，無需采用金屬催化劑，反應條件簡單、溫和，底物范圍廣泛，反應產率高；本發明所制備產物是通過2H?氮雜環丙烯對多肽鏈的修飾反應得到的，這類產物為將來此反應在抗體偶聯藥物中的應用提供一定的技術支持，使得這個反應有可能被應用到靶向藥物的合成之中。

技術領域

本發明屬于生物有機化學技術領域，尤其涉及一種氮雜環丙烯在抗體偶聯藥物連接體的應用修飾的方法。

背景技術

癌癥是目前困擾人口老齡化的主要疾病之一。針對癌癥通常的治療手段也就是化學療法、放射療法、手術切除和靶向治療，其中最常見的便是化療。但是，由于化療藥物不能有效地區分癌細胞和正常細胞，所以這類化療藥物存在嚴重的副作用并且會降低患者的生活質量。此外，小分子藥物的開發耗時太長，并且風險較大。因此，亟需開發出能夠靶向消滅癌細胞而不影響正常細胞的新型抗腫瘤藥物。而抗體偶聯藥物(ADC)就是一種應對癌癥的新穎的治療形式，它可以在分子層面上實現選擇性的將有效的藥物分子傳遞至靶向癌細胞，產生作用，從而提高了治療效果，降低了藥物對人全身的毒性。這種治療手段是要明顯優于目前的傳統化療方式的。

ADC由三個主要成分組成，包括：(1)抗體，通常為單克隆蛋白質；(2)將抗體與有效負載連接的連接體；(3)具有高藥效的有效負載。ADC藥物作用機制：當ADC分子被釋放到血液中，分子表面的抗體會精確識別靶向癌細胞的抗原部分，通過ADC與抗原復合物的內吞作用被帶入到抗原內部，隨后這種復合物在溶酶體內加工并釋放藥物分子，有效地破壞DNA鏈或施加RNA聚合酶抑制劑，導致細胞的死亡。鑒于這樣的作用機理，理想的抗體需要有足夠強的抗原親和力和特異性。但是目前發現的有極高抗原親和力的抗體在實際臨床上穿透腫瘤的效率很低，所以ADC藥物的高效抗原親和力不一定能帶來高效的臨床療效。

在ADC藥物偶聯方法里面，酰胺偶聯是一種很有效的方法利用賴氨酸殘基和活化后的羧酸接頭生成抗體酸酯。利用一分子酰胺和一分子活化的羧酸分子是目前有機合成里最可靠，最高效的化學轉變。但是，通常在一個抗體分子上有大約80個賴氨酸殘基，但是只有約10個殘基是可利用的。因此這種連接形態所得到的DAR值多變，而且連接位置不同。在maytansinoid型ADC藥物中，DAR值平均為3.5～4，分布在0～7之間。所以說，DAR值和其分布范圍極大地影響著ADC藥物的效率和細胞毒性。此外，一些賴氨酸殘基在抗體抗原的作用中由于相互作用，導致和連接體的親和力降低，因此會導致ADC藥物體系的復雜，治療指數差的情況。所以基于賴氨酸殘基的連接反應需要控制反應過程中DAR值和分布范圍(通常在3～4之間)。

基于半胱氨酸的連接反應依賴于特定抗體上的半胱氨酸殘基與一分子連接好藥物負載的巰基化合物的反應。通常來說，抗體中不含有游離的巰基，并且所有的半胱氨酸殘基都以二硫鍵的形式呈現，在人類的lgG1抗體中，這通常也是現代ADC藥物中研究的最多的抗體，含有4個鏈間，12個鏈內的二硫鍵。4個鏈間的二硫鍵通常不是決定lgG1抗體穩定的關鍵因素，可以在溫和的條件下選擇性還原得到2、4、6、8個游離的巰基同時保證12個鏈內二硫鍵的完整。由于連接位點數量的限制，以及反應的特異性，基于半胱氨酸的連接反應在DAR值和異質性上的共軛要優于賴氨酸的連接反應。但是這種連接法還有改進的空間以實現更好的DAR和異質性。Junutula和同事介紹了兩個新的半胱氨酸殘基用于抗體的選擇性修飾，并且這項技術在體內研究中已經取得了很好的療效和治療窗口。二溴馬來酰亞胺、二溴噠嗪二酮和基于1，3-雙(對甲苯磺酰基)丙烷基類可以接受來自鏈間二硫鍵還原的兩分子半胱氨酸衍生物從而生成了橋接的抗體。理論上講，這些特定位點的結合在結構的穩定性，同質性和可以良好控制的DAR值上能有很不錯的表現，從而可能會提高相對應ADC藥物的治療功效。