[發明專利]一種新孢子蟲NcMIC26抗原及其應用

有效

• 申請號: 201910422519.1
• 申請日: 2019-05-21
• 公開（公告）號: CN110183527B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 劉晶;王先梅;劉群;許建海
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/44
• 分類號: C07K14/44;C12N15/30;C12N15/70;A61P33/02;G01N33/531;G01N33/569
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 王芊雨;張鵬

本發明公開了一種新孢子蟲NcMIC26抗原及其應用。本發明首先公開了一種新孢子蟲NcMIC26抗原，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明進一步公開了上述抗原的重組蛋白在構建新孢子蟲間接ELISA診斷試劑盒中應用。本發明通過篩選得到了一種新的適用于新孢子蟲病的診斷抗原，利用其重組蛋白作為包被抗原建立了間接ELISA試劑盒，操作簡單、快速高效，特異性好、敏感性高，重復性好，可用于檢測牛群新孢子蟲感染情況，能檢測到常用的NcSRS2蛋白檢測不到的陽性樣本，可獲得更準確的檢測數據，對于新孢子蟲病的防治具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種生物技術領域，特別是關于一種新孢子蟲NcMIC26抗原及其應用。

背景技術

新孢子蟲病(neosporosis)是由新孢子蟲(Neospora caninum)引起的能感染多種動物的原蟲病，新孢子蟲引發的疾病有全球性分布趨勢。該病對牛和犬的危害最為嚴重，是引起牛流產、產弱胎、死胎、木乃伊胎和犬的神經系統障礙性疾病的主要原因之一，給畜牧業帶來嚴重的經濟損失。不同國家和地區所報道的牛新孢子蟲病的感染強度存在一定差異，血清抗體陽性率為13.5％～82％。目前，對新孢子蟲還沒有任何有效的藥物和疫苗。

新孢子蟲病的主要檢測方法有病原學診斷、組織病理學診斷、分子生物學診斷以及血清學診斷等。由于新孢子蟲為專性細胞內寄生原蟲，病原學及病理學診斷較為困難，而血清學診斷方法能應用于動物活體檢測，可以在流行病學調查過程中提供動物感染階段的信息，并且其感染新孢子蟲后抗體水平的高低，可能提供關于動物患有新孢子蟲病、反芻動物流產以及經胎盤傳播新孢子蟲風險的信息等優點，已成為流行病學調查研究的重要手段。最早應用于檢測新孢子蟲抗體的血清學技術是間接免疫熒光試驗(IFAT)，也是目前新孢子蟲血清學檢測方法的“金標準”。但是該實驗需要的試劑(如特異性熒光標記抗體的質量)和儀器(如熒光顯微鏡)及操作步驟較為復雜，對實驗操作人員的要求較高，對結果臨界值的判定有一定的困難，因此不適用于臨床上田間大批量篩查實驗。隨著大規模流行病學研究的開展，ELISA檢測方法由于其簡單、快速、高效，結果的判定不受主觀因素的影響等優點而被廣泛應用，逐漸成為血清學檢測的主要方法。

早期間接ELISA以速殖子、裂解的新孢子蟲抗原以及免疫刺激復合物(ISCOM)診斷抗原進行檢測，在新孢子蟲診斷過程中顯示良好的診斷參數，但由于新孢子蟲與同屬于頂復亞門原蟲的弓形蟲親緣關系相近，容易出現交叉反應而導致特異性不高，且該抗原制備成本較高。隨著重組蛋白表達及純化技術的發展，應用高純度重組蛋白代替天然抗原作為檢測抗原的診斷技術彌補了上述缺點。目前公認的也是應用最廣泛的新孢子蟲診斷抗原為NcSRS2，在血清學檢測中顯示良好的特異性和敏感性。但由于牛感染新孢子蟲的不同時期以及抗體水平在感染牛體內存在一定的波動性。在一些研究中發現，新孢子蟲陽性胎兒的母牛血清學呈陰性，造成這種現象的原因可能是由于母牛體內抗體水平的波動所造成，或者是由于檢測方法的敏感性不高形成的假陰性。已報道的檢測抗原在對牛群的新孢子蟲病的實際診斷過程中仍存在局限性，對流行病學調查的結果造成一定誤差。

因此，迫切需要篩選新的診斷效果更好的優勢抗原，建立更加敏感、特異的血清學診斷方法，能應用于動物群體檢測，為新孢子蟲病的診斷提供依據。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種新的新孢子蟲優勢抗原，該抗原對檢測新孢子蟲具有高的敏感性和好的特異性。

本發明的另一目的在于提供包括上述抗原的重組蛋白作為包被抗原的間接ELISA試劑盒，建立簡單、快速、高效的血清學診斷方法。

為實現上述目的，本發明提供了一種新孢子蟲NcMIC26抗原，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。