[發明專利]NPM1基因突變分型檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201910421885.5
• 申請日: 2016-07-08
• 公開（公告）號: CN110408697A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 蔣析文;劉悅
• 申請（專利權）人: 中山大學達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海助之鑫知識產權代理有限公司 31328
• 代理人: 陳詳

1.一種用于檢測NPM1基因突變的引物對組，其特征在于，所述引物對組包括NPM1基因特異性的正向和反向引物；其中，

NPM1基因特異性的正向引物的核苷酸序列為：

5’-GGTGGTTCTCTTCCCAAAG-3’

NPM1基因特異性的反向引物的核苷酸序列為：

5’-CTGTTACAGAAATGAAATAAGACG-3’；

優選地，

所述引物對組還包括內標TBP基因特異性的正向和反向引物；其中，

內標TBP基因特異性的正向引物的核苷酸序列為：

5’-CTAAAGACCATTGCACTTCGT-3’

內標TBP基因特異性的反向引物的核苷酸序列為：

5’-ATCAGTGCCGTGGTTCGTG-3’。

2.一種用于檢測NPM1基因突變的探針組，其特征在于，所述探針組包括選自下組的一種或多種探針：

NPM1基因突變A型特異性探針，其核苷酸序列為：

5’-CAAGATCTCTGT+CT+GGCAGTGG-3’；

NPM1基因突變B型特異性探針，其核苷酸序列為：

5’-CAAGATCTCTGC+AT+GGCAGTGG-3’；和，

NPM1基因突變D型特異性探針，其核苷酸序列為：

5’-CAAGATCTCTGC+CT+GGCAGTGG-3’；

優選地，

所述探針組還包括：

內標TBP基因特異性探針，其核苷酸序列為：

5’-AATCCCAAGCGGTTTGCTGCGGTAA-3’；

在另一優選例中，所述探針組中各探針修飾有不同的熒光基團；優選地，所述熒光基團選自下組：FAM、TEXAS、CY5、TAMRA、和HEX；

在另一優選例中，所述探針組中的一種或多種探針具有鎖核酸修飾(LNA修飾)。

3.如權利要求2所述的探針組，其特征在于，所述探針組包括：

NPM1基因突變A型特異性探針，其序列是：

5’-CAAGATCTCTGT+CT+GGCAGTGG-3’；

NPM1基因突變B型特異性探針，其序列是：

5’-CAAGATCTCTGC+AT+GGCAGTGG-3’；

NPM1基因突變D型特異性探針，其序列是：

5’-CAAGATCTCTGC+CT+GGCAGTGG-3’；

其中，各序列中“+”表示對右側堿基進行LNA修飾。

4.如權利要求3所述的探針組，其特征在于，所述探針組中的一種或多種探針的5’端修飾有熒光報告基團；和/或，所述探針組中的一種或多種探針的3’端修飾有熒光淬滅基團。

5.一種引物探針混合液，其特征在于，所述引物探針混合液由NPM1基因特異性的正、反向引物及特異性的突變分型探針組成，分型探針同時進行了LNA修飾，NPM1基因特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-GGTGGTTCTCTTCCCAAAG-3’,5’-CTGTTACAGAAATGAAATAAGACG-3’；突變A型特異性鎖核酸探針的序列是5’-CAAGATCTCTGT+CT+GGCAGTGG-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；突變B型特異性鎖核酸探針的序列是5’-CAAGATCTCTGC+AT+GGCAGTGG-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團TEXAS RED和熒光淬滅基團BHQ2；突變D型特異性鎖核酸探針的序列是5’-CAAGATCTCTGC+CT+GGCAGTGG-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團CY5和熒光淬滅基團BHQ2；其中各序列中“+”表示對右側堿基進行LNA修飾。

6.一種檢測NPM1基因突變分型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物對組；

優選地，所述試劑盒還包括權利要求2所述的探針組；

或者，所述試劑盒還包括權利要求5所述的引物探針混合液。