[發明專利]一種基于dSviCas3的基因轉錄調控方法

在審

• 申請號: 201910421000.1
• 申請日: 2019-05-13
• 公開（公告）號: CN110438143A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 童望宇;李梅莉
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/77;C12N15/81;C12N15/90;C12N9/22;C12R1/19;C12R1/15;C12R1/865
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本發明公開了一種基于dSviCas3的基因轉錄調控方法，首次實現了I型CRISPR?Cas系統對生物細胞基因組中基因的定向轉錄調控。通過SviCas3工程突變得到的喪失對靶序列切割能力dSviCas3，結合t?DNA、g?DNA或g?RNA可對生物細胞基因組中的基因進行準確、方便、有效的基因轉錄調控。優化后的該轉錄調控工具因其分子量小且能通過t/g?DNA導向可望在許多生物領域中優于基于dCas9所構建的轉錄調控工具。

本發明涉及生物技術領域的基因工程技術，確切地說是一種基于dSviCas3的基因轉錄調控方法。

背景技術

生物體中基因調控主要發生在轉錄水平。基因轉錄調控指對生物體內基因從DNA轉錄成RNA水平上的調控(轉錄調控)，有正調控(如：轉錄因子)和負調控(如：阻遏蛋白)之分，常發生在細胞核內，也可發生在細胞質中。生物通過基因轉錄調控改變代謝方式以適應環境的變化，是細胞生理學和表觀遺傳學的重要研究領域。

應用CRISPR-Cas系統進行基因調控已有報道，但用于調控工具開發的蛋白質存在著分子量大(Cas9：158441.41 Da/1368 aa；Cas13a/C2c2：166277.01 Da/1389 aa)不便于載體攜帶及由g-RNA導向之缺陷[Matthew H Larson，Luke A Gilbert，Xiaowo Wang，Wendell A Lim，Jonathan S Weissman&Lei S Qi(2013)CRISPR interference(CRISPRi)for sequence-specific control of gene expression.Nat Protoc 8，2180-2196，doi：10.1038/nprot.2013.132；Omar O.Abudayyeh，Jonathan S.Gootenberg，SilvanaKonermann，Julia Joung，Ian M.Slaymaker，David B.T.Cox，Sergey Shmakov，KiraS.Makarova，Ekaterina Semenova，Leonid Minakhin，Konstantin Severinov，AvivRegev，Eric S.Lander，Eugene V.Koonin，and Feng Zhang(2016)C2c2 is a single-component programmable RNA-guided RNA-targeting CRISPR effector.Science(NewYork，N.Y.)353，aaf5573，doi：10.1126/science.aaf5573]。本發明描述的是一種基于I-B-SviCas系統中的相對小分子的SviCas3(84352.40 Da/771 aa)、可由t-DNA或g-DNA/g-RNA導向的對生物細胞進行mRNA水平上的轉錄調控。