[發明專利]一種食品脂質提取及檢測食品脂質的方法

有效

• 申請號: 201910420276.8
• 申請日: 2019-05-20
• 公開（公告）號: CN110243956B
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 陳歷俊;趙軍英;姜鐵民;喬為倉;劉茜;劉妍;張明輝;王筱迪;張瀅
• 申請（專利權）人: 北京三元食品股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

1.一種食品脂質提取方法，其特征在于：包括將食品樣品與混合內標混合，然后與脂質提取溶劑和超純水進行多次混合以及多次離心，合并多次離心后所得上層相包含神經節苷脂，合并多次離心后所得下層有機相包含磷脂和甘油酯、脂肪酸；其中，所述食品為母乳，所述脂質為神經節苷脂、磷脂、甘油酯和脂肪酸；

與脂質提取溶劑和超純水進行多次混合以及多次離心，合并多次離心后所得上層相包含神經節苷脂，合并多次離心后所得下層有機相包含磷脂和甘油酯、脂肪酸的步驟包括以下步驟：

1#管：200μL母乳、200μL超純水、1.8mL甲醇、800μL二氯甲烷手動搖勻震蕩10s，超聲5min，加入200μL超純水和800μL二氯甲烷，手動搖勻震蕩10s，離心，6000r/min 15min，取出下層有機相到2#管；

1#管上層加1.6mL二氯甲烷，離心，6000r/min 15min，取出下層有機相到3#管；

2#管下層有機相、1mL超純水、2.2mL甲醇、0.6mL二氯甲烷，手動搖勻，離心，3000g/min10min，取出下層有機相到3#管混合，氮氣吹干，溶解到1ml二氯甲烷：甲醇＝2:1中，用于固相萃取分離甘油酯、脂肪酸和磷脂：

活化硅膠柱：用3mL正己烷活化硅膠柱，棄去洗脫液，然后將復溶后的脂質溶液倒入柱子中；

洗脫非極性脂：首先向柱子中加入3mL的正己烷/二乙醚8:2溶液，收集洗脫液，然后加入3mL正己烷/二乙醚1:1溶液，收集洗脫液；氮吹干后，2mL復溶液復溶，取出100μL，加入900μL復溶液，6000r/min，5min離心后，取上清上機檢測甘油酯和游離脂肪酸；

洗脫磷脂：向柱子中加入4mL的甲醇，然后加入2mL甲醇和2mL二氯甲烷/甲醇/水3:5:2，收集洗脫液，氮氣吹干后，加入200μL復溶液，6000r/min，5min離心后，取上清上機檢測磷脂；

取出1#管上層相與2#管上層混合，氮氣吹干后，用80％的甲醇200μL復溶，6000r/min，5min離心后，取上清上機檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述混合內標為氘代甘油酯、不同種類氘代磷脂、不同種類氘代鞘脂中的一種或多種；

所述混合內標的量由如下方法確定得到：混合內標加入后的各脂質的質量濃度為原樣品中同種類脂質的質量濃度的60-140％。

3.一種檢測食品脂質的方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)磷脂/甘油酯/脂肪酸檢測：取權利要求1-2中任一項方法提取得到的所述甘油酯、脂肪酸和磷脂，將其稀釋至脂質可定量檢測的上限和下限之間，采用LC-Q-TOF-MS AB Sciex6600在如下條件中進行檢測：色譜柱為：購自Phenomenex,Torrance,CA,USA的Kinetex C18柱，規格為150mm×4.6mm,2.6μm；或者購自Phenomenex,Torrance,CA,USA的Kinetex C18柱，規格為50mm×3mm,2.6μm；柱溫為30-50℃；流動相A為5nmol/L的乙酸銨溶液，乙酸銨溶液的溶劑為體積比為1：1：1的甲醇、乙腈、水，流動相B為5nmol/L的乙酸銨的異丙醇溶液，流速0.3-0.8mL/min，進樣量1-3μL，進行梯度洗脫；

所述磷脂/甘油酯/脂肪酸的檢測按如下表進行洗脫梯度：

2)神經節苷脂的檢測：取權利要求1-2中任一項方法提取得到的所述神經節苷脂，將其稀釋至脂質可定量檢測的上限和下限之間，采用LC-Q-TOF-MS AB Sciex6600在如下條件中進行檢測：色譜柱：購自Waters的BEH C18，規格為100×2.1mm，1.7um；柱溫為30-50℃；流動相A為90ml水+10ml甲醇+0.1ml 1mol/L的乙酸銨，流動相B為100ml甲醇+0.1ml 1mol/L的乙酸銨，流速0.3mL/min，進樣量為10μL，進行梯度洗脫；

所述檢測神經節苷脂的方法按如下表進行洗脫梯度：

所述食品為母乳。