[發(fā)明專利]一種含鐵蛋白的熒光鑒定方法

有效

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• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110129032B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設計）人: 李艷霞;繆玲;黃露;陳毅挺
• 申請（專利權）人: 閩江學院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C09K11/06
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發(fā)明提供一種含鐵蛋白的熒光鑒定方法，涉及材料化學和蛋白質鑒定技術領域。所述鑒定方法采用自制的石墨烯量子點（GQDs）與含鐵蛋白相互作用促使GQDs熒光快速猝滅的分子熒光光譜分析技術。GQDs的制備是采用直鏈淀粉為綠色原料，于反應釜中水熱反應，自然冷卻后離心形成的黃色澄清液體既為GQDs溶液。所制備的GQDs可以與Fe³⁺和含鐵蛋白有效結合，導致熒光瞬間猝滅，從而實現(xiàn)含鐵蛋白的鑒定。該鑒定方法操作簡便快捷，樣品消耗量少，使用成本低，可特異性猝滅含鐵蛋白，有效去除基質干擾，鑒定結果可靠，可用于鐵缺乏疾病的初期篩查，具有很大的使用價值和市場前景。

技術領域

本發(fā)明涉及一種含鐵蛋白的熒光鑒定方法，涉及材料化學和蛋白質鑒定技術領域。

背景技術

含鐵蛋白作為一種靈敏、微量、有實用診斷價值的指標，已受到血液、腫瘤、營養(yǎng)等臨床學科的重視，取得了卓有成效的研究及應用。含鐵蛋白可以與小分子化合物結合，如多酚類小分子化合物沒食子酸( gallic acid，GA) ，研究其與GA的相互作用，可為作為小分子藥物模型的GA在醫(yī)藥領域的應用提供理論依據(jù)。含鐵蛋白還可以通過與氧化鐵納米顆粒的相互作用，降低血紅蛋白的過氧化物酶活性，增加細胞色素 C 的過氧化物酶活性。另外，含鐵蛋白可以催化活性氮RNS轉化為惰性的NO₃^-，阻止蛋白質的硝化；同時，含鐵蛋白也可通過高價鐵氧化物及·NO₂的產生來加速蛋白質的硝化。含鐵蛋白與多種物質材料可以發(fā)生相互作用，且與人類生活等密切相關，含鐵蛋白的鑒定在免疫顯微剖析、疾病診斷、鑒別診斷、觀察某些疾病活動，估計預后及復發(fā)，均具有一定的意義，研究其鑒定方法勢在必行。

含鐵蛋白鑒定方法多樣，其中自動無焰原子吸收光譜分析法、放免分析法 (RIA)、免疫放射分析法 (IRMA) 靈敏度較高，是目前開展最為普遍的檢測方法，但所需設備復雜昂貴，不利于推廣。免疫單擴散技術操作簡便，易于普及，但靈敏度低。核素摻入試驗又不適于大量的臨床常規(guī)檢查。因此需要建立更直接、高效、簡單的檢測方法以提高含鐵蛋白鑒定的應用價值。

分子熒光光譜分析是利用某些物質分子受光照射時所發(fā)生的熒光的特性和強度，進行物質的定性分析或定量分析的一種方法。它可以分析物質的熒光特性，如GQDs的熒光譜圖形狀、最大發(fā)射波長、發(fā)光強度等，并通過最大發(fā)射波長和強度的變化來判斷ＤＮＡ的修飾情況。同時可通過研究 GQDs的光致發(fā)光發(fā)射譜來表征物質對GQDs熒光強度的影響。可用于目標分子的定性和定量分析，它的先進之處就在于它的鮮明性、特異識別性、廣泛實用性。簡單的操作，低廉的成本，直接的分析檢測，目前已經(jīng)發(fā)展成為一種重要且有效的光譜化學分析手段，在生物、食品、藥物分析、環(huán)境分析等領域已應用頗廣。

在眾多分析方法中，由于分子熒光光譜分析具有靈敏度高、選擇性好、快速、簡單、信息量豐富，能提供熒光物質的多種參數(shù)等優(yōu)點已引起國內分析界廣泛重視。但由于很多物質本身不發(fā)熒光，使得找到一種合適的熒光物質至關重要。據(jù)此本發(fā)明利用自制GQDs設計一種含鐵蛋白的鑒定方法，采用直鏈淀粉自制GQDs直接與含鐵蛋白相互作用，并通過熒光強度猝滅來檢測含鐵蛋白，可用于含鐵蛋白的直接鑒定，該鑒定方法簡單明了，成本低廉，每次使用量少，反應快，檢測迅速，直接出分析結果，可用于鐵缺乏疾病的初期篩查。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種含鐵蛋白的熒光鑒定方法，用于一類蛋白（含鐵蛋白）的識別與鑒定。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

所述一種含鐵蛋白的熒光鑒定方法，具體步驟如下：

1) GQDs的制備

稱取直鏈淀粉，加入25 mL蒸餾水在60 ℃下水浴加熱15 min，取出加入反應釜中，烘箱中加熱，自然冷卻后移出，離心得黃色澄清液體于冰箱中冷藏，備用。

2）GQDs與金屬離子的相互作用