[發(fā)明專利]閃光型均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I/T的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910409947.0 | 申請(qǐng)日： | 2019-05-16 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110031635A | 公開（公告）日： | 2019-07-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 江學(xué)成;楊曉光 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 杭州普魯米生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/68 | 分類號(hào)： | G01N33/68;G01N21/76 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310052 浙江省杭州市濱江區(qū)濱安路*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 心肌肌鈣蛋白T 抗體 待測(cè)樣品 心肌肌鈣蛋白I 檢測(cè) 化學(xué)發(fā)光 技術(shù)檢測(cè) 偶聯(lián) 樣本 發(fā)光 閃光 心肌肌鈣蛋白I/T 辣根過(guò)氧化物酶 肌肌鈣蛋白 肌鈣蛋白I 發(fā)光底物 高靈敏度 檢測(cè)心肌 梯度稀釋 激發(fā)液 種檢測(cè) 血清 孵育 | ||
1.閃光型均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I/心肌肌鈣蛋白T的方法，其特征是以血清作為待測(cè)樣品；包括以下步驟：
1)、抗體Ⅰ偶聯(lián)發(fā)光底物，得抗體Ⅰ-A；
2)、抗體Ⅱ偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶，抗體Ⅱ-HRP；
3)、檢測(cè)：
分成以下兩種方式：
方式一、當(dāng)抗體Ⅰ、抗體Ⅱ?yàn)榘袠?biāo)cTnI/cTnT的特異性抗體時(shí)，在樣本中加入本底抑制劑、抗體Ⅰ-A和抗體Ⅱ-HRP，從而組成檢測(cè)體系；
方式二、當(dāng)抗體Ⅰ、抗體Ⅱ?yàn)榘袠?biāo)cTnI/cTnT的特異性抗體的抗體時(shí)，在樣本中加入本底抑制劑、抗體Ⅰ-A、抗體Ⅱ-HRP以及靶標(biāo)cTnI/cTnT的特異性抗體，從而組成檢測(cè)體系；
將上述檢測(cè)體系(37±0.5)℃孵育(15±1)分鐘；然后加入激發(fā)液，立即檢測(cè)發(fā)光信號(hào)；
4)、判定：
先將cTnI/cTnT樣品進(jìn)行梯度稀釋后作為樣本按照上述步驟3)進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得發(fā)光信號(hào)和心肌肌鈣蛋白I/心肌肌鈣蛋白T濃度所對(duì)應(yīng)的公式；
然后將待測(cè)樣品作為樣本按照上述步驟3)進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得待測(cè)樣品發(fā)光信號(hào)，再將待測(cè)樣品發(fā)光信號(hào)代入上式公式內(nèi)，從而最終獲得待測(cè)樣品中心肌肌鈣蛋白I/心肌肌鈣蛋白T的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的閃光型均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I/心肌肌鈣蛋白T的方法，其特征是：
當(dāng)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I時(shí)：
抗體Ⅰ為cTnI單克隆抗體Ⅰ或山羊抗鼠IgG二抗，所述抗體Ⅰ-A為cTnI-A或GAM-A；
抗體Ⅱ?yàn)閏TnI單克隆抗體Ⅱ或山羊抗兔IgG二抗，所述抗體Ⅱ-HRP為cTnI-HRP或GAR-HRP；
當(dāng)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白T時(shí)：
抗體Ⅰ為cTnT單克隆抗體Ⅰ或山羊抗鼠IgG二抗，抗體Ⅰ-A為cTnT-A或GAM-A；
抗體Ⅱ?yàn)閏TnT單克隆抗體Ⅱ或山羊抗兔IgG二抗，抗體Ⅱ-HRP為cTnT-HRP或GAR-HRP。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的閃光型均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I/心肌肌鈣蛋白T的方法，其特征是：
一、檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I：
所述步驟1)中：抗體Ⅰ為cTnI單克隆抗體Ⅰ，發(fā)光底物為9，10-二氫吖啶，所得的得抗體Ⅰ-A為cTnI-A；
所述步驟2)中：抗體Ⅱ?yàn)閏TnI單克隆抗體Ⅱ，所得的抗體Ⅱ-HRP為cTnI-HRP；
所述步驟3)中，采用雙抗夾心法，用PBS緩沖液(PH＝7.4)將制備的cTnI-A和cTnI-HRP分別稀釋，檢測(cè)時(shí)，cTnI-A稀釋液、cTnI-HRP稀釋液、待測(cè)樣品分別加50ul，再加入10ul本底抑制劑；37℃孵育15min后，加入100ul激發(fā)液立即啟動(dòng)檢測(cè)；
所述步驟4)中，所對(duì)應(yīng)的公式為y＝3.60391+0.59661x；
二、檢測(cè)心肌肌鈣蛋白T：
所述步驟1)中：抗體Ⅰ為cTnT單克隆抗體Ⅰ，發(fā)光底物為9，10-二氫吖啶，所得的得抗體Ⅰ-A為cTnT-A；
所述步驟2)中：抗體Ⅱ?yàn)閏TnT單克隆抗體Ⅱ，所得的抗體Ⅱ-HRP為cTnT-HRP；
所述步驟3)中，采用雙抗夾心法，用PBS緩沖液(PH＝7.4)將制備的cTnT-A和cTnT-HRP分別稀釋，檢測(cè)時(shí)，cTnT-A稀釋液、cTnT-HRP稀釋液、待測(cè)樣品分別加50ul，再加入10ul本底抑制劑；37℃孵育15min后，加入100ul激發(fā)液立即啟動(dòng)檢測(cè)；
所述步驟4)中，所對(duì)應(yīng)的公式為y＝3.47698+0.67069x。
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