[發明專利]一種純化Fc融合蛋白的純化方法

在審

• 申請號: 201910409793.5
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110172102A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 游文龍;李文賓
• 申請（專利權）人: 北京軍科華仞生物工程技術研究有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 北京中企訊知識產權代理有限公司 11677
• 代理人: 熊亮

1.一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：其步驟為：

(1)用Mabselect SuRe LX捕獲GLP-1-Fc融合蛋白；

(2)用Capto Q ImpRes離子交換層析進一步去除降解片段；

(3)用CHT I型填料去除大量的聚集體。

2.根據權利要求1所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：根據步驟(1)，其具體操作步驟為：

(1.1)用親和平衡液平衡層析柱4個柱體積；

(1.2)上樣，上樣保留時間為4-10min；

(1.3)完成上樣后，用親和平衡液再平衡3個柱體積，然后用淋洗液沖洗4個柱體積；

(1.4)再用醋酸鹽沖洗層析柱3個柱體積，樣品用醋酸鹽洗脫，收集主峰；

(1.5)用NaOH清洗3個柱體積，用平衡液平衡至pH穩定后，2個柱體積的乙醇保存層析柱。

3.根據權利要求2所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：步驟(1.1)中，親和平衡液為25mM Tris，25mM NaCl，pH7.5；

步驟(1.3)中，淋洗液為25mM Tris，0.3M NaCl，pH7.5；

步驟(1.4)中，沖洗的醋酸鹽為50mM醋酸鹽-pH4.5，洗脫的醋酸鹽為50mM醋酸鹽-pH＝3.5；

步驟(1.5)中，NaOH為0.1M NaOH，乙醇為20％乙醇。

4.根據權利要求2所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：步驟(1.4)中，收集主峰為收集紫外280nm處的主峰。

5.根據權利要求4所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：收峰參數為：開始收集的UV＝80mAU，終止收集的UV＝80mAU。

6.根據權利要求1所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：根據步驟(2)，其具體操作步驟為：

(2.1)用陰離子平衡液平衡層析柱3個柱體積；

(2.2)上樣，上樣載量≤30mg/ml，上樣時保留時間為4-10min；

(2.3)上樣結束后，用平衡液沖洗層析柱5個柱體積，樣品用洗脫液洗脫，收集主峰；

(2.4)用再生液沖洗層析柱3個柱體積，最后用2個柱體積的乙醇保存層析柱。

7.根據權利要求6所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：步驟(2.1)中，陰離子平衡液為30mM Tris-HCl，85mM NaCl，pH7.8；

步驟(2.3)中，洗脫液為30mM Tris-HCl，190mM NaCl，pH7.8；

步驟(2.4)中，乙醇為20％的乙醇。

8.根據權利要求6所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：步驟(2.3)中，收集主峰為收集紫外280nm處的主峰。

9.根據權利要求8所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：收峰參數為：開始收集的UV＝100mAU，終止收集的UV＝100mAU。

10.根據權利要求1所述的一種純化Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于：根據步驟(3)，其具體操作步驟為：

(3.1)用30mM Tris，5mM PB，5％PEG1000，pH8.0，cond8.5ms/cm平衡層析柱5個柱體積；

(3.2)樣品調節到與平衡液一致的條件上樣，收集流穿的目的蛋白，樣品上樣結束后繼續用平衡液平衡，直至樣品收集完畢；

(3.3)樣品收集完成后用500mM PB再生層析柱3個柱體積，再用0.5M NaOH清洗3個柱體積。