[發明專利]一種細菌富硒蛋白的制備方法與應用

在審

• 申請號: 201910408735.0
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110295211A
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發明（設計）人: 王行國;陳昌梅;田金寶;周佳卉;李亞東;朱蓉;喻雪婧
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;A23K50/80;A23K20/147;C12R1/01
• 代理公司: 武漢帥丞知識產權代理有限公司 42220
• 代理人: 朱必武;周瑾

1.一種細菌富硒蛋白的制備方法，其特征在于：茶樹內生草螺菌在含硒酸鹽的培養基中發酵，可將硒酸鹽還原后再經過硒蛋白合成代謝途徑合成硒蛋白。

2.如權利要求1所述的一種細菌富硒蛋白的制備方法，其特征在于：所述的茶樹內生草螺菌在含硒酸鹽培養基中的發酵制備方法包括如下步驟：

（1）茶樹內生草螺菌與硒酸鹽共培養合成硒蛋白：首先將茶樹內生草螺菌菌種接種營養肉湯培養基，每分鐘150轉搖動，28 °C培養過夜；然后將活化的菌液以體積比1:100接入含有10 mM 硒酸鈉的LB液體培養基中，搖床轉速每分鐘250轉，溫度為37 °C，培養至OD₆₀₀=0.8；最后在發酵罐中發酵，按照發酵培養基體積1%的接種量接入已培養好的菌液，在溫度為37℃、轉速200 rpm、pH7.0、通氣量為1 v/v^.min條件下發酵24-48 小時至OD₆₀₀=2；

（2）可溶性硒蛋白的制備：發酵完成后,在轉速6000 rpm、4℃離心15分鐘收集菌體，并用0.1 M PBS懸浮，再在相同條件下重復離心洗滌2次以去掉培養物中的殘留成分；將離心收集的菌體懸浮在溶液I中,超聲波破碎菌體，轉速12000 rpm、4℃離心15-20分鐘，去掉沉淀物并收集上清液；合并收集的上清液用溶液II 4℃透析過夜,中間更換3次溶液II以除去蛋白溶液中的小分子無機物，透析后即為硒蛋白制品。

3.如權利要求2所述的一種細菌富硒蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中的發酵培養基組成為：1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%氯化鈉、50-100 mM硒酸鈉、水1L，pH7.2。

4.如權利要求2所述的一種細菌富硒蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中的溶液I為0.1 mM EDTA、50 mM TrisHCl,pH8.0；溶液II為0.1 mM EDTA、50 mM PBS, pH7.4。

5.一種細菌富硒蛋白的應用，其特征在于：所述的細菌富硒蛋白可直接噴灑到魚飼料上涼干后喂魚；也可以添加到魚飼料內制備含硒魚飼料。