[發明專利]一種動物流感抗體阻斷檢測試紙

在審

• 申請號: 201910407978.2
• 申請日: 2019-05-15
• 公開（公告）號: CN110058018A
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 李青梅;張改平;王彥紅;郭軍慶;劉肖;石建州;李鴿;孫亞寧;楊繼飛;柴書軍;趙東
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/531;C07K16/10;C07K14/11;C07K1/22;C12N15/70
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發明公開了一種動物流感抗體阻斷檢測試紙，由支撐板、抗原墊、金標墊、檢測膜和吸水墊構成，抗原墊上吸附流感病毒檢測抗原，金標墊吸附膠體金標記的抗流感病毒單克隆抗體mAb1，檢測膜上含有檢測線T“|”和質控線C“|”印跡，檢測線T為抗流感病毒單克隆抗體mAb2或抗流感病毒多克隆抗體pAb1印跡，質控線C為抗小鼠IgG兔抗體pAb2或金黃色葡萄球菌SPA印跡。本發明試紙實現了流感病毒中和抗體的快速檢測，可實現對動物流感母源抗體和免疫抗體水平的實時監測，以及疫苗免疫效果的免疫評價，并且操作簡單，人人都可操作，能較好滿足不同層次人員的需要，易于大范圍推廣應用，具有廣闊的市場前景和較大的經濟、社會效益。

技術領域

本發明涉及一種家禽疫病抗體檢測器具，特別是涉及一種動物流感抗體阻斷檢測試紙。

背景技術

流行性感冒病毒(Influenza virus)，簡稱流感病毒，是一種引起人類及動物患流行性感冒的人獸共患傳染病病原，可引起急性上呼吸道感染，并借由空氣迅速的傳播，在世界各地常發生周期性的大流行。流感病毒為單股負鏈RNA病毒，屬于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)流感病毒屬，病毒基因組由8條分節段的RNA片段組成，分別編碼聚合酶(PB2、PB1、PA)、血凝素(HA)、神經氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基質蛋白(M1、M2)、和非結構蛋白(NS1、NS2)等10種病毒蛋白，根據其核蛋白(NP)和基質蛋白(M)的差異性可將流感病毒分為A、B、C三個型，其中A型流感病毒的宿主范圍最廣，可以感染人類與很多種類的哺乳動物和禽類。根據流感病毒感染宿主的不同可分為不同的群，如人流感病毒、禽流感病毒(AIV)、豬流感病毒(SIV)等；根據其血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)抗原性的不同可將HA分為16個亞型(H1-H16)，NA分為9個亞型(N1-N9)，最近在蝙蝠中發現2種流感病毒新亞型，命名為H17N10和H18N11。流感病毒可由HA和NA的不同組合而形成多種亞型，其中高致病性流感病毒主要分布于H5和H7亞型，世界動物衛生組織(OIE)將高致病性禽流感列為A類動物疫病，我國也將其列為一類動物疫病。高致病性禽流感病毒不僅可對養殖業造成毀滅性打擊，而且能夠持續不斷地跨種間傳播感染人類，20世紀以來的流感大流行或地區性流行給全球的公共衛生、經濟等帶來了重大影響，其流行毒株均為禽或豬流感病毒通過重排或直接轉變而形成。

目前，我國動物流感的防控采取以疫苗免疫為主的策略，動物母源抗體是影響流感疫苗免疫效果的重要因素，對動物母源抗體和免疫抗體水平的監測是制定和優化流感免疫程序的重要依據；同時，免疫動物的血清抗體水平，尤其是中和抗體水平是流感疫苗免疫評價的重要指標。目前常用流感抗體檢測方法包括血凝抑制試驗(HI)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和病毒中和試驗(VN)。HI試驗是流感抗體檢測的經典方法，可有效評估疫苗免疫抗體水平和免疫保護效果，但血清中的非特異凝集素和非特異抑制素、以及紅細胞和主觀判定等均影響HI試驗的準確性。間接ELISA具有較高的靈敏性，適于大量的血清學監測，可以標準化而且結果易于分析，但不能區分中和與非中和抗體，無法準確評價免疫保護效果。VN試驗是最敏感而特異的中和抗體檢測方法，流感中和抗體水平與免疫保護直接相關，但該技術方法不但費時，操作繁瑣，費用昂貴，而且病毒培養必須在III級生物安全實驗室(P3)操作，技術和安全措施要求極高，無法實現臨床樣品的大量、實時檢測。因此，雖然上述檢測方法可檢測流感抗體水平，但均存在試驗操作復雜，耗時長，需要特定的專業技能和儀器設備等，成本昂貴，常限于實驗室內進行，很難在基層普及和推廣，不適合大批量樣本的普查。此外，當前廣泛流行的流感病毒流行毒株與我國普遍使用的疫苗毒株在遺傳學、免疫反應和保護效力等方面存在較大差異，免疫動物中流感強毒感染仍然時有發生，同時由于缺乏血清學標志和配套的鑒別診斷方法，其在我國的大規模應用使得通過血凝抑制試驗(HI)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等抗體檢測技術很難區分弱毒免疫和野毒感染，不利于流感的控制和凈化。