[發明專利]一種用于抗器官移植排斥反應的脂質體及制備方法與應用

有效

• 申請號: 201910406036.2
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110124056B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 郭猛;劉艷芳;劉芳;張璐定;王全興;丁國善;曹雪濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/66;A61K47/64;A61K45/00;A61P37/06
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 孫躍虹

本發明公開了一種用于抗器官移植排斥反應的脂質體，是由以下原料制備而成：鏈霉親和素偶聯的GM2單鏈抗體負載在人工脂質體中，鏈霉親和素偶聯的GM2單鏈抗體負載在人工脂質體中濃度為0.1～1ng/μL，生物素化的Qa?1或HLA?E與生物素化PD?L1均為等摩爾比，生物素化的Qa?1或HLA?E、生物素化PD?L1的總量與上述鏈霉親和素偶聯的GM2單鏈抗體負載人工脂質體的摩爾比為100:1～200:1。本發明提供的用于抗器官移植排斥反應的脂質體可在體內發揮抗排異作用，是一種新型脂質體藥物，用于多種器官移植術后的抗排異作用。

技術領域

本發明屬于免疫治療和脂質體藥物靶向治療技術領域，具體來說涉及一種掛載有免疫檢查點NKG2A/PD1配體片段的用于抗器官移植排斥反應的脂質體及制備方法及應用。

背景技術

器官移植已經成為治療各種臟器終末期疾病的唯一有效治療手段，許多患者通過器官移植延長了生命。近年來，FK506、雷帕霉素新型免疫抑制劑的臨床應用，雖然降低了移植排斥反應的發生率，但仍然存在兩大問題：其一，免疫抑制劑并不能完全解決排異反應的問題，提示傳統的以抑制IL-2基因表達實現免疫抑制手段的局限性；其二，長期應用免疫抑制劑存在諸多不良反應，包括藥物的毒性、過度抑制機體免疫力造成的感染及新生腫瘤等。因此，通過發掘免疫細胞活化及其調控機制，從中發現機體存在的調控分子并應用于抗排異反應的治療，是進一步提高移植術后抗排異效果的有效途徑。

人體的免疫功能受到激發時會發生活化，但這種活化通常局限在一個可控的范圍內，不會發生過度活化引起機體損傷，其內在的重要機制是“免疫檢查點分子”的調控。這類分子類似汽車的剎車系統，在免疫系統活化時能夠及時“剎車”，使免疫系統的活化保持在正常的范圍之內。過去的十多年，不斷有新的共刺激分子發現，并被證實在維持免疫平衡即針對病原體抗原的免疫反應與針對自身抗原或同種移植抗原的免疫耐受中發揮關鍵的作用。目前，通過拮抗免疫檢查點信號途徑活化免疫細胞用于腫瘤治療的方法已應用于臨床，并取得了良好的反應率。但可否通過活化免疫檢查點信號途徑，抑制器官移植術后免疫細胞活化，從而發揮抗排異反應尚缺乏研究。

NKG2A和PD1是免疫細胞中重要的負調控分子，其配體分別為非經典MHC I類分子HLA-E(鼠中同源物為Qa-1)與PDL1。NKG2A/CD94二聚體可以與HLA-E(Qa-1)相互作用，通過胞內段ITIM基序活化SHP分子，進而抑制Syk、Vav1等轉錄因子，抑制NK細胞與CD8+T細胞殺傷活性。PD-L1可以與活化T細胞表面的PD1結合，促使SHP-1磷酸化，抑制下游Syk的活化，阻斷TCR信號轉到，使T細胞分泌細胞因子、增殖與殺傷能力受損。在腫瘤免疫中，通過阻斷NKG2A或PD1信號，可以有效抑制腫瘤的生長、轉移，增加腫瘤免疫微環境中淋巴細胞的殺傷效力，并在臨床實驗中取得了較好的反應率。但是能否通過活化NKG2A、PD1信號進而抑制排斥反應尚無報道。其中重要的原因是NKG2A和PD1的配體胞外段蛋白分子量小，體內代謝極快，難以通過直接注射的方法在移植物局部維持有效的血藥濃度，限制了其在體內實驗與臨床研究中的直接應用。

脂質體是雙親性脂分子在水相中進行自組裝形成的雙層膜脂小泡，脂質體不僅可以將特定物質(如藥物和基因片段)包埋在脂質體內部，形成特定的運輸系統，也可以將特定蛋白掛載在脂質體表面。最近有數項研究通過將脂質體表面負載生物活性分子，在動物模型中實現了有效治療。如：Toita等將IL-10分子掛載于脂質體表面用于治療肥胖小鼠、控制其體內炎癥；Francesca等將MHC-肽復合物以及粘附分子掛載于脂質體表面，成功構建了活化T細胞的人工抗原提呈細胞(aAPC)；Razazan等將納米抗體偶聯在脂質體表面，用來特異性運載腫瘤抗原。上述研究提示，可以將NKG2A和PD1配體肽段掛載于脂質體表面延長其體內半衰期，在較長時間內與免疫細胞相互作用，激活NKG2A和PD1下游信號，有望克服目前免疫檢查點信號途徑分子在抗移植排斥應用研究中的瓶頸。

發明內容