[發明專利]一種細胞規?；囵B方法、純化方法及細胞信使在審
| 申請號： | 201910405915.3 | 申請日： | 2019-05-15 |
| 公開（公告）號： | CN110093312A | 公開（公告）日： | 2019-08-06 |
| 發明（設計）人： | 張永國;何君 | 申請（專利權）人： | 張永國 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775;C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 王煥 |
| 地址： | 100000 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 無血清培養基 規模化培養 細胞 生物培養器 細胞成活率 培養細胞 細胞信使 培養基 規模化 上清液 微載體 血清 滅菌 接種 | ||
1.一種細胞規模化的培養方法，其特征在于，將待培養細胞與滅菌后的GE微載體接種于含血清的培養基，在生物培養器中培養，然后換成無血清培養基，在無血清培養基中繼續培養4-7d，收集上清液；
所述待培養細胞為臍帶間充質細胞、脂肪細胞中的一種或兩種；
優選地，所述待培養細胞的接種密度為(8-9)*103cell/ml；
更優選地，所述待培養細胞的接種密度為8.6*103cell/ml。
2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，在無血清培養基培養過程中，氧氣的濃度為4-7wt％，優選地氧氣的濃度為5wt％。
3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，接種后10-15rpm攪拌培養24-26h，再以18-30rpm攪拌培養24-72h。
4.根據權利要求3所述的培養方法，其特征在于，培養24-72h后，吸棄培養上清液，采用生理鹽水洗滌，添加胰酶消化后，加入含血清的培養基，微載體脫落后，再添加新的GE微載體，即可。
5.根據權利要求4所述的培養方法，其特征在于，添加胰酶消化40-60s。
6.權利要求1-5任一項所述的培養方法所得細胞的純化方法，其特征在于，包括如下步驟：
將細胞采用中空纖維柱提取得到100000MW以下的組分，進行濃縮過濾、輻照滅菌、冷凍干燥即可。
7.根據權利要求6所述的純化方法，其特征在于，在中空纖維柱中反復提取1-2次。
8.根據權利要求6所述的純化方法，其特征在于，冷凍干燥的溫度為-40～-50℃之間。
9.一種細胞信使，采用權利要求1-8任一項所述的培養方法培養得到。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于張永國，未經張永國許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201910405915.3/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
