[發(fā)明專利]在PDCD1基因表達的剪接水平抑制PD-1信號的反義寡核苷酸及其篩選方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910405276.0
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110157705B
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 華益民
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州安天圣施醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/686;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司 32102
• 代理人: 蔣慧妮

本發(fā)明提供了一種在PDCD1基因表達mRNA前體剪接水平抑制PD?1信號通路的反義寡核苷酸及其篩選方法與應(yīng)用。本發(fā)明中的反義寡核苷酸能使編碼PD?1蛋白的基因PDCD1在mRNA前體剪接水平發(fā)生改變，促進轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物外顯子3發(fā)生跳躍，使生成的全長PD?1蛋白量顯著減少、缺乏外顯子3的截短蛋白（稱作PD?1Δ3）顯著增加。所述反義寡核苷酸可應(yīng)用于抗癌藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種在PDCD1基因表達的剪接水平抑制PD-1信號的反義寡核苷酸及其篩選方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

癌癥已成為人類健康的第一殺手，但治療癌癥的手段和藥物仍很有限。當(dāng)前免疫檢查點阻斷是一種新的抗癌策略并已取得一定的成效。由PDCD1 基因編碼的PD-1(亦稱CD279)是免疫檢查點通路中的關(guān)鍵分子，PD-1 定位于免疫細(xì)胞特別是T細(xì)胞的細(xì)胞膜上，通過與腫瘤細(xì)胞表面的配體分子PD-L1和PD-L2結(jié)合產(chǎn)生負(fù)調(diào)控信號，導(dǎo)致T細(xì)胞疲勞以及腫瘤細(xì)胞逃逸。阻斷PD-1和其配體的結(jié)合可解除T細(xì)胞疲勞，抑制腫瘤生長。目前已有多個PD-1抗體和PD-L1抗體上市，對霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、小細(xì)胞肺癌等在內(nèi)的多種惡心腫瘤有明顯的治療效果。

PDCD1基因共有5個外顯子，編碼288氨基酸，氨基端信號肽切除后的成熟蛋白為268個氨基酸。PDCD1基因存在多種可變剪接(alternative splicing)方式，其中外顯子3跳躍是PDCD1基因的主要可變剪接方式；缺乏外顯子3的PD-1剪接異構(gòu)體稱作PD-1Δ3。外顯子3編碼整個跨膜序列，缺乏膜定位序列的PD-1Δ3是一種可溶性蛋白，理論上既可以存在于細(xì)胞內(nèi)也可以分泌進入組織液和血液，考慮其含有信號肽序列，PD-1Δ3 很可能是一種分泌性蛋白?，F(xiàn)已在人的血清和組織液中發(fā)現(xiàn)了可溶性PD-1 (sPD-1)，根據(jù)基因表達分析確證其為PD-1Δ3。游離在血液和組織液中的PD-1Δ3保留了與配體結(jié)合的能力，可以和PD-1競爭結(jié)合PD-L1和 PD-L2等配體，起到天然自身抗體的作用。近期一項臨床研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌患者在厄洛替尼(erlotinib)治療后的存活期與血清中sPD-1/PD-1Δ3 濃度成正相關(guān)。因此，PD-1Δ3不僅僅是丟失了功能，它還能拮抗 PD-L1/PD-1的活性。

在以PD-1/PD-L1為靶點的藥物研發(fā)領(lǐng)域，各大公司主要方向是抗體藥。盡管抗體藥已取得一定的效果，但癌癥患者的反應(yīng)率(responder rate) 并不高，藥效也有待提高。