[發明專利]一種刺激誘導單個核細胞擴增為γδT細胞的組合物及其應用

有效

• 申請號: 201910404788.5
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110272871B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 鄧蒙蒙;程簫;劉丹;吳疆;王保如
• 申請（專利權）人: 安徽瑞達健康產業有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 合肥方舟知識產權代理事務所(普通合伙) 34158
• 代理人: 劉躍

本發明公開了一種可刺激單個核細胞使其誘導擴增為γδT細胞的組合物，及使用該組合物對單個核細胞(PBMCs)在體外大量擴增γδT細胞的方法及其應用。通過加入唑來膦酸誘導活化，僅利用IL?2即可刺激誘導擴增γδT細胞，獲得的γδT細胞具有數量大、純度高、細胞活性強等特點，該方法操作步驟簡單，且大大降低了培養成本，更有利于后續大量生產培養擴增γδT細胞，方便用于腫瘤的細胞免疫治療，具有很好的推廣價值和臨床應用價值。

技術領域：

本發明涉及一種可刺激單個核細胞使其誘導擴增為γδT細胞的組合物，及使用該組合物對單個核細胞(PBMCs)在體外大量擴增γδT細胞的方法。

背景技術：

腫瘤是目前對人類健康造成威脅的重大疾病之一，無論死亡率和發病率均居高位。腫瘤免疫療法是繼手術、放療、化療之后的第四種腫瘤治療方法，也是目前最受關注和治療效果最好的療法。粘膜(表皮)組織作為物理屏障含有廣泛的細胞類型包括非淋巴系和淋巴系免疫細胞，特別是T細胞。

研究已經證明T細胞，特別是表達γδ受體的T細胞在維持粘膜組織平衡和阻止病原微生物感染和惡性癌變等表皮組織壓力中發揮關鍵作用。γδT細胞主要在胸腺中發育成熟，通過V(D)J基因重組產生γδT細胞受體(TCR)。通過特異性的基因重排，從一個共同淋巴細胞前體(common lymphoidprecursor,CLP)分化為表達αβ受體和γδ受體的T細胞系。γδT細胞通過關聯CD3復合物傳導TCR信號，在健康成年人的外周血中，γδT細胞只占循環T細胞的1-10％；αβT細胞占循環T細胞的90％以上，并且通過關聯CD3復合物直接傳導胞內信號。與αβTCR不同，γδTCR可以直接結合抗原且不依賴MHC分子介導的抗原呈遞，因此在γδT細胞表面不表達CD4和CD8分子。廣泛的研究表明，根據δ鏈的表達情況，γδT細胞可以分為三大類，表達Vδ1鏈的γδT細胞主要分布在粘膜表面的內皮層，很少一部分分布在外周血中。Vδ1型γδT細胞在抵抗損傷、感染和惡性轉化表皮完整性中發揮重要作用。γδT細胞另一類主要的亞群是表達Vδ2鏈的γδT細胞，而且Vδ2鏈幾乎只與Vγ9鏈配對，是健康成年人中主要的循環γδT細胞，可以達到外周血循環γδT細胞的50-90％。有趣的是，一旦被激活，Vδ2T細胞獲得專職抗原呈遞細胞(APCs)的特性,包括表達共刺激分子、粘附分子、和抗原呈遞分子(例如，CD80,CD86,CD11b,CD18,CD54和MHCⅡ)。第三類γδT細胞亞群表達Vδ3鏈,約占循環T細胞的0.2％，包括CD4+,CD8+和CD4-CD8-亞群。Vδ3γδT細胞不穩定表達CD56、CD161、HLA-DR和NKG2D。

與αβT細胞不同，γδT細胞不易受抗原加工和呈遞缺失的影響，因此γδT細胞具有很高的臨床腫瘤免疫治療潛在應用價值。γδT細胞在腫瘤免疫監視和抗腫瘤免疫反應中發揮重要作用。Girardi等人的研究表明表皮定位的γδT細胞在阻止小鼠表皮形成中發揮重要作用，γδT細胞缺失的小鼠易得皮膚癌(Science.2001；294(5542):605-609.)。Liu等人的研究表明，與對照組小鼠相比，通過尾靜脈注射同基因型的γδT，可以顯著降低前列腺腫瘤荷瘤小鼠腫瘤的發病率并顯著延長荷瘤小鼠的生存期(J Immunol.2008；180(9):6044-6053.)。Zhao等人的研究表明，在無性細胞瘤和精原細胞瘤中，腫瘤組織相關的肉芽腫性炎癥中積累大量的γδT浸潤性T淋巴細胞，這些浸潤的γδT細胞具有殺傷自體腫瘤細胞的活性，可以通過識別Vδ的單克隆抗體阻斷γδT細胞的殺傷活性；γδT細胞分泌大量的促炎性因子，例如IFN-γ和TNF-α(Immunol Invest.1995；24(4):607-618.)。Todaro等人的研究表明，γδT細胞可以殺死結直腸癌腫瘤干細胞，腫瘤干細胞在腫瘤起始、生長、轉移、抵抗傳統腫瘤治療手段從而復發中發揮重要作用(J Immunol.2009；182(11):7287-7296.)。目前已經從多種腫瘤(包括結直腸癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和腎癌等)分離的浸潤性T淋巴細胞(TILs)鑒定出γδT細胞(J Immunol.2005；174(3):1338-1347.；J Immunol.2005；175(8):5481-5488.；Mol Immunol.2007；44(4):302-310.)。