[發明專利]一種細胞組合物在癌細胞NCI-H1975上的應用

在審

• 申請號: 201910404770.5
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110272870A
• 公開（公告）日: 2019-09-24
• 發明（設計）人: 邢永梅;鄧蒙蒙;程簫;劉丹;吳疆;王保如
• 申請（專利權）人: 安徽瑞達健康產業有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 合肥方舟知識產權代理事務所(普通合伙) 34158
• 代理人: 劉躍

本發明公開了一種細胞組合物在癌細胞NCI?H1975上的應用，具體涉及γδT細胞和NK細胞組合物在NCI?H1975上的應用。通過共培養誘導擴增方法獲得γδT和NK細胞組合物，混合γδT和NK細胞毒性/活性強，對NCI?H1975的作用強，幾乎可以100％殺傷NCI?H1975，為NCI?H1975型癌癥及疾病提供治療方案；簡化了在臨床中治療過程，簡化了治療手段，也降低了治療成本。

技術領域：

本發明涉及生物技術領域，具體涉及免疫細胞在疾病上的應用，更具體涉及細胞組合物在癌細胞NCI-H1975上的應用。

背景技術：

γδT細胞是一種既能殺傷癌細胞，腫瘤干細胞，又能識別癌抗原的免疫細胞。

γδT細胞是執行固有免疫功能的T細胞，其TCR由γ和δ鏈組成。此類T細胞主要分布于腸道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下組織，在外周血中只占CD3+T細胞的0.5％-1％。其TCR缺乏多樣性，可直接識別某些完整的多肽抗原。γδT細胞所識別的抗原種類有限:①HSP；②感染細胞表面CD1分子提成的脂類抗原；③某些病毒蛋白或表達于感染細胞表面的病毒蛋白；④細菌裂解產物中的磷酸化抗原。

γδT細胞是一種既能殺傷癌細胞，腫瘤干細胞，又能識別癌抗原的免疫細胞，它的殺傷性較強，但腫瘤干細胞殺傷不如NK細胞。因此，它主要用于殺傷癌細胞與協助DC細胞識別發現癌細胞抗原，然后將這些抗原進行殺傷或是傳遞給其他細胞。同時，γδT細胞主要分布于皮膚和黏膜組織上，因此對于黏膜方面的癌癥治療效果突出，比如消化道、呼吸道、生殖系統方面的癌癥效果顯著。

γδT細胞主要在胸腺中發育成熟，通過V(D)J基因重組產生γδT細胞受體(TCR)。通過特異性的基因重排，從一個共同淋巴細胞前體(common lymphoidprecursor,CLP)分化為表達αβ受體和γδ受體的T細胞系。γδT細胞不易受抗原加工和呈遞缺失的影響，因此γδT細胞具有很高的臨床腫瘤免疫治療潛在應用價值。γδT細胞在腫瘤免疫監視和抗腫瘤免疫反應中發揮重要作用。

γδT細胞作用還體現在：

①γδT細胞能夠與多種免疫細胞發生作用，參加抗腫瘤免疫應答。

②γδT細胞能夠在腫瘤發生的早期階段迅速引起有效的抗腫瘤免疫應答。

③γδT細胞在抗腫瘤免疫過程中具有重要的保護作用。

④γδT能夠利用細胞毒效應殺傷腫瘤細胞，防止腫瘤的發生發展。

⑤γδT細胞能夠分泌相關因子，這些因子能夠放大腫瘤信號。

⑥γδT細胞能分泌穿孔素，誘導腫瘤細胞凋亡。

由于γδT細胞在外周血中的含量極低，大大限制了γδT細胞作為過繼免疫細胞在臨床上的應用。目前從外周血單個核細胞擴增γδT細胞，擴增倍數低，細胞純度及細胞量不高。擴增出的γδT細胞很難滿足臨床需求，即使通過優化各種誘導條件及擴增方法擴增出的單一γδT細胞在相應的免疫性疾病和腫瘤疾病上有所應用，但是應用后并未達到人們理想中的效果。

細胞免疫治療是目前最具有前景的腫瘤治療方式之一，通過體外擴增或改造后回輸到病人體內達到殺傷腫瘤細胞的目的或者通過活化機體免疫系統，增強腫瘤患者自身免疫功能從而抵抗腫瘤或其他疾病。目前，NK細胞免疫治療受到越來越多的重視。NK細胞占人外周血淋巴細胞的5-15％，一般定義其表型為CD3-CD56+，NK細胞又可以進一步細分為兩個主要的亞群：具有免疫調節功能的CD56highCD16-細胞和具有細胞毒活性的CD56dimCD16+細胞。NK細胞在抗病毒感染和抗腫瘤的早期免疫反應中發揮著重要的免疫監視功能，NK細胞不需要識別腫瘤特異性抗原，便可直接、快速的發揮細胞毒活性。特別重要的是NK細胞能夠有效地清除機體內的腫瘤干細胞樣細胞，抑制腫瘤的生長和轉移。