[發(fā)明專利]一種基于兩自由度連續(xù)離心機(jī)的細(xì)胞分離方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910403677.2
• 申請(qǐng)日: 2019-05-15
• 公開（公告）號(hào): CN110079439A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高會(huì)軍;林偉陽(yáng);佟明斯;楊憲強(qiáng);于興虎;張建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 林偉陽(yáng)
• 主分類號(hào): C12M1/04
• 分類號(hào): C12M1/04;C12M1/02;C12M1/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 牟永林

基于兩自由度連續(xù)離心機(jī)的細(xì)胞分離方法，它涉及一種細(xì)胞分離方法。本發(fā)明解決了現(xiàn)有的細(xì)胞分離方法離心效率低，易使溶液受到污染以及步驟繁瑣的問題。將細(xì)胞溶液加入至離心管中，控制離心機(jī)開始轉(zhuǎn)動(dòng)，在離心機(jī)的作用下離心管將培養(yǎng)液排除，然后向離心管注入溶膠液，溶膠液和細(xì)胞在離心管內(nèi)充分混合；清洗殘留在通道和培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞和溶膠液，充入無菌氣體，將清洗液注入離心機(jī)：控制擺動(dòng)攪拌機(jī)停止上下擺動(dòng)，細(xì)胞全部聚集在離心管的底部，打開第三溶液存儲(chǔ)器的閥門，將防凍液注入到離心管內(nèi)，攪拌后將液體通過出液口排出并保存，細(xì)胞被防凍液保護(hù)起來。本發(fā)明的基于兩自由度連續(xù)離心機(jī)的細(xì)胞分離方法用于生物醫(yī)學(xué)細(xì)胞分離技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞分離方法，具體涉及一種基于兩自由度連續(xù)離心機(jī)的細(xì)胞分離方法，屬于生物醫(yī)學(xué)細(xì)胞分離技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。

目前，細(xì)胞分離一般都需要人工操作大部分內(nèi)容：1.人工向離心機(jī)內(nèi)加入溶液并需要手動(dòng)攪拌實(shí)現(xiàn)溶液充分混合；2.離心完成后，需要人工完成排液、清洗及提取操作；3.人工對(duì)提取出的細(xì)胞處理后冷藏儲(chǔ)存等。而在這一系列過程中存在以下問題，容易使溶液受到污染導(dǎo)致提取失敗：其一、人工操作細(xì)胞離心裝置一般都是分步驟進(jìn)行，效率較低，期間遇到污染源則會(huì)使溶液受到污染；其二、現(xiàn)有的細(xì)胞分離裝置的在內(nèi)部環(huán)境這方面沒有刻意控制，僅依靠離心的時(shí)間及速度來控制分離效果，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞活性造成一定影響，其三、現(xiàn)有的細(xì)胞分離純化裝置在分離過后，往往都需人工過濾，祛除內(nèi)部雜質(zhì)，步驟較為繁瑣。以上幾點(diǎn)導(dǎo)致整個(gè)過程中人為操作的比重極大，對(duì)操作者的熟練度有一定的要求，且過程中對(duì)操作空間的無菌條件要求較高，且過程繁瑣效率較低，不利于大批量的細(xì)胞分離操作。

綜上，現(xiàn)有的細(xì)胞分離方法采用人工操作細(xì)胞離心效率低，易使溶液受到污染以及細(xì)胞分離純化裝置在分離過后需要人工過濾、祛除內(nèi)部雜質(zhì)、步驟繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)有的細(xì)胞分離方法采用人工操作細(xì)胞離心效率低，易使溶液受到污染以及細(xì)胞分離純化裝置在分離過后需要人工過濾、祛除內(nèi)部雜質(zhì)，存在步驟繁瑣的問題，進(jìn)而提供一種基于兩自由度連續(xù)離心機(jī)的細(xì)胞分離方法。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采取的技術(shù)方案是：

本發(fā)明的基于兩自由度連續(xù)離心機(jī)的細(xì)胞分離方法是按著以下步驟實(shí)現(xiàn)的：

步驟一、準(zhǔn)備四個(gè)溶液存儲(chǔ)器和一個(gè)廢液存儲(chǔ)器16：

分別為第一溶液存儲(chǔ)器11、第二溶液存儲(chǔ)器12、第三溶液存儲(chǔ)器13和第四溶液存儲(chǔ)器14，向第一溶液存儲(chǔ)器11內(nèi)裝入清洗液，向第二溶液存儲(chǔ)器12裝入溶膠液，向第三溶液存儲(chǔ)器13內(nèi)裝入防凍液，第四溶液存儲(chǔ)器14為備用存儲(chǔ)器；

步驟二、四個(gè)溶液存儲(chǔ)器分別采用一根管路與離心機(jī)15的進(jìn)液口連接，將離心機(jī)15的出液口與廢液存儲(chǔ)器16通過管路連接；

步驟三、將一次性旋轉(zhuǎn)密封進(jìn)液裝置1安裝在離心機(jī)15的上端中心處，將細(xì)胞溶液加入至離心管2-3中，控制離心機(jī)15開始轉(zhuǎn)動(dòng)，在離心機(jī)15的作用下離心管2-3將培養(yǎng)液排除，然后向離心管2-3注入溶膠液，溶膠液和細(xì)胞在離心管2-3內(nèi)充分混合；

步驟四、清洗殘留在通道和培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞和溶膠液：

從離心機(jī)15的進(jìn)液口充入無菌氣體使得導(dǎo)管內(nèi)殘留的溶膠液進(jìn)入離心機(jī)15內(nèi)，控制離心機(jī)15清洗時(shí)間范圍為50-70秒，然后無菌氣體通過排液口排出離心機(jī)15，細(xì)胞質(zhì)量較大而留在離心管內(nèi)；

步驟五、將清洗液注入離心機(jī)15：