[發(fā)明專利]一種檢測(cè)阿爾茨海默癥標(biāo)志物的電化學(xué)免疫傳感器、其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910399480.6
• 申請(qǐng)日: 2019-05-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110006976B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉一鑣;何廣莉;牛鵬飛;侯夢(mèng)丹;秦偉鵬;張平平;張守仁;楊保成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黃河科技學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N27/327
• 分類號(hào): G01N27/327
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新;張麗

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)阿爾茨海默癥標(biāo)志物的電化學(xué)免疫傳感器、其制備方法及應(yīng)用，具體包括以下幾個(gè)步驟：①鉑碳電極的預(yù)處理，通過(guò)電沉積的方式將氧化石墨烯量子點(diǎn)沉積到鉑碳電極上；②制備的金雙錐包鉑納米結(jié)構(gòu)作為基底材料，并將之通過(guò)電泳沉積法沉積到氧化石墨烯量子點(diǎn)表面，從而進(jìn)一步提高阿爾茨海默癥標(biāo)志物捕獲抗體的固載量，并加速電極表面的電子傳遞速率；③制備的AuPd?PDA納米復(fù)合材料作為信號(hào)放大標(biāo)簽固載檢測(cè)抗體；通過(guò)基底材料與AuPd?PDA復(fù)合納米材料的協(xié)同作用，進(jìn)一步提高傳感器的靈敏度；制備的電化學(xué)免疫傳感器，可用于阿爾茨海默癥標(biāo)志物的檢測(cè)；具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)限低的特點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于電化學(xué)免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種檢測(cè)阿爾茨海默癥標(biāo)志物的電化學(xué)免疫傳感器、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

阿爾茨海默癥（Alzheimer’s disease, AD）是一種以認(rèn)知障礙和行為損害為主要特征的神經(jīng)退行性疾病，是老年癡呆癥最常見(jiàn)的一種形式，約占老年癡呆癥的50-60%。臨床表現(xiàn)為記憶功能減退、語(yǔ)言障礙、智力低下、思維遲鈍等癥狀，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致死亡。 AD是一個(gè)非常復(fù)雜的疾病，通常情況下沒(méi)有明顯的遺傳學(xué)特征，似乎年齡是其主要的危險(xiǎn)因素。AD在診斷上的復(fù)雜性決定了它在臨床上有一個(gè)很寬泛的界定，一些外部環(huán)境因素和內(nèi)部基因因素會(huì)進(jìn)一步加重病情。外在的因素主要有腦外傷、抽煙、肥胖、糖尿病、高血壓以及高金屬離子含量等。內(nèi)部基因因素主要有早老素基因突變，APOE4基因多態(tài)性，編碼凝集素和網(wǎng)格蛋白的基因等。研究發(fā)現(xiàn)，含有APOE4基因的人患阿爾茨海默癥的風(fēng)險(xiǎn)較不含該基因的人高3～10倍，此外有研究發(fā)現(xiàn)，APOE4蛋白還具有促進(jìn)Aβ肽聚集和抑制Aβ肽降解酶活性的作用，由此可見(jiàn)，APOE4蛋白與阿爾茨海默癥的發(fā)病有重要關(guān)系。因此，檢測(cè)血液中的APOE4蛋白含量對(duì)阿爾茨海默癥的預(yù)防與早期診斷有重要的意義。

檢測(cè)血液中的APOE4蛋白對(duì)阿爾茨海默癥的預(yù)防以及早期診斷有重要意義。目前對(duì)阿爾茨海默癥標(biāo)志物的檢測(cè)方法有很多，如放射免疫分析法、電化學(xué)發(fā)光法、比色法等等，但多數(shù)檢測(cè)方法繁瑣、操作復(fù)雜、費(fèi)用昂貴或檢測(cè)限高，因此建立一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏的檢測(cè)方法有重要意義。

目前電化學(xué)免疫傳感器已經(jīng)廣泛用于疾病標(biāo)志物的檢測(cè)，雙抗夾心型電化學(xué)免疫傳感器結(jié)合了高特異性免疫分析技術(shù)和高靈敏、速度快的電化學(xué)分析技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，兼具了高靈敏度、高特異性、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢測(cè)、環(huán)境檢測(cè)、食品安全控制以及生物分析等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器是基于電信號(hào)強(qiáng)弱確定標(biāo)志物濃度的一類檢測(cè)裝置，具有以下優(yōu)點(diǎn)：其一是采用簡(jiǎn)單、快速、有效的方法捕獲抗體固定在電極表面；其二是利用檢測(cè)抗體修飾AuPd-PDA納米材料，進(jìn)一步放大信號(hào)。

金雙錐包鉑納米結(jié)構(gòu)沉積在氧化石墨烯量子點(diǎn)表面，大大增加了基底材料的比較面積，可以顯著提高捕獲抗體的固載量，并有效加速電極界面的電子傳遞速率；同時(shí)，AuPd-PDA納米結(jié)構(gòu)本身具有很好的過(guò)氧化氫催化性能，與檢測(cè)抗體結(jié)合后，大大提高了檢測(cè)信號(hào)，從而應(yīng)用于阿爾茨海默癥標(biāo)志物的靈敏檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種一種檢測(cè)阿爾茨海默癥標(biāo)志物的電化學(xué)免疫傳感器、其制備方法及應(yīng)用。

基于上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：

一種AuPd-PDA納米結(jié)構(gòu)，通過(guò)下述步驟制得：

（1）取 ZnO納米棒超聲分散于Tris-HCl緩沖液中，隨后加入多巴胺鹽酸鹽，60 ±5℃攪拌3.5~4.5h；離心分離，收集固體得到ZnO@PDA納米棒；最后，將ZnO@PDA納米棒分散于超純水中，加入NH₄Cl 溶液60 ±5℃攪拌0.5~1.5h用以刻蝕ZnO納米棒，得到PDA納米管，ZnO納米棒與多巴胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1:1；