[發明專利]一種檢測阿爾茨海默癥標志物的電化學免疫傳感器、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910399480.6
• 申請日: 2019-05-14
• 公開（公告）號: CN110006976B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 劉一鑣;何廣莉;牛鵬飛;侯夢丹;秦偉鵬;張平平;張守仁;楊保成
• 申請（專利權）人: 黃河科技學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新;張麗

1.一種利用AuPd-PDA納米結構制備檢測阿爾茨海默癥標志物的電化學免疫傳感器的方法，其特征在于，制備步驟如下：

（1）將ApoE4檢測抗體與AuPd-PDA納米結構混合，超聲50~70min后，離心分離，可得檢測抗體修飾的AuPd-PDA納米結構，分散至PBS緩沖液，記為Ab₂-AuPd-PDA溶液，備用；

（2）鉑碳電極的預處理：通過電沉積的方法將氧化石墨烯量子點沉積到鉑碳電極表面得到一層氧化石墨烯顆粒；

（3）然后通過電泳沉積的方法將金雙錐包鉑納米結構沉積在氧化石墨烯顆粒上，用超純水沖洗后，晾干；

（4）步驟（3）得到的電極表面滴加捕獲抗體，孕育，然后用超純水沖洗后，晾干；

（5）滴加的BSA溶液封閉非特異性結合位點，孕育，然后用超純水沖洗電極表面，晾干；

（6）滴加0.01-20000ng/mL的疾病標志物ApoE4溶液，孕育，用超純水沖洗電極表面，晾干；

（7）將Ab₂-AuPd-PDA溶液滴涂于電極表面，孵化，用超純水沖洗電極表面后，晾干，制得一種檢測阿爾茨海默癥標志物的電化學免疫傳感器，

所述AuPd-PDA納米結構通過下述步驟制得：

（a）取 ZnO納米棒超聲分散于Tris-HCl緩沖液中，隨后加入多巴胺鹽酸鹽，60 ±5℃攪拌3.5~4.5h；離心分離，收集固體得到ZnO@PDA納米棒；最后，將ZnO@PDA納米棒分散于超純水中，加入NH₄Cl 溶液60 ±5℃攪拌0.5~1.5h用以刻蝕ZnO納米棒，得到PDA納米管，ZnO納米棒與多巴胺鹽酸鹽的質量比為1:1；

（b）將0.4-2 mL HAuCl₄ 和 0.1-0.5 mL H₂PdCl₄ 加入煮沸的PDA納米管水溶液中，攪拌，然后加入抗壞血酸溶液，反應50~70分鐘后，離心分離，收集固體得AuPd-PDA納米結構；

所述金雙錐包鉑納米結構，通過下述步驟制得：

種子生長法制備金納米雙錐溶液，將2mL的金納米雙錐溶液離心，將沉淀分散于2mL、0.08M CTAC中，依次加入10μL、0.01M AgNO₃、5μL、0.1M抗壞血酸后混勻，60℃搖床放置5小時，離心后，分散于2mL、0.005M CTAB中，再依次加入2-30μL、0.001M H₂PtCl₄、2-30μL、0.01M抗壞血酸混勻后，攪拌反應8~12h，離心后，分散于2mL水中可得金雙錐包鉑納米結構。

2.根據權利要求1所述制備檢測阿爾茨海默癥標志物的電化學免疫傳感器的方法，其特征在于，所述步驟（a）中ZnO納米棒的具體制備過程如下：將硝酸鋅和氫氧化鈉溶解在30mL超純水中，使得硝酸鋅的濃度為0.5M，氫氧化鈉濃度為10M；然后依次加入25 mL 乙醇和5mL乙二胺；然后180 ℃水熱反應 20 h，收集固體，即得。

3.根據權利要求1所述制備檢測阿爾茨海默癥標志物的電化學免疫傳感器的方法，其特征在于，所述步驟（a）中ZnO納米棒的用量為10mg，Tris-HCl的濃度為10mM、用量為20mL，NH₄Cl 溶液的濃度為0.1M，用量為10mL。

4.根據權利要求1所述制備檢測阿爾茨海默癥標志物的電化學免疫傳感器的方法，其特征在于，步驟（1）的具體過程如下：將100μL、1mg/mL ApoE4的檢測抗體與1mL、1mg/mLAuPd-PDA納米結構混合，超聲1h后，離心分離，可得檢測抗體修飾的AuPd-PDA納米結構，分散到1mL、10mM PBS緩沖液中，備用。